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supererry
Nuovo Arrivato
Prov.: Torino
Città: Torino
82 Messaggi |
 Inserito il - 02 agosto 2012 : 22:57:02
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Ciao a tutti, sto provando a fare un immunofluorescenza su tessuto cerebrale con anticorpi anti SIRT2 e GSK3b, ma mi vengono molto fondose e difficilmente vedo le cellule nel tessuto.
Permeabilizzo con triton x-100 1% e inizialmente usavo un blocking con 10% NGS, 0,5% triton. Ora sto utilizzando un NGS 5% e 0,03% triton, ma il risultato non cambia.
Cosa mi consigliate? Sono tessuti fissati con PAF 4% e sezionati al criostato. ogni fetta e' spessa 30um.
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 03 agosto 2012 : 07:53:54
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Prova a usare BSA per bloccare.
Puoi anche provare con del Sudan Black per rimuovere un po' di fondo.
Altrimenti non ti resta che cambiare fissativo e/o anticorpi... |
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supererry
Nuovo Arrivato
Prov.: Torino
Città: Torino
82 Messaggi |
Inserito il - 03 agosto 2012 : 14:40:40
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può essere un'idea diluire ulteriormente l'anticorpo secondario?
di solito lo metto 1:1000 |
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
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Immunofluorescenza e background
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