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prandoFDA
Nuovo Arrivato
Prov.: Brescia
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17 Messaggi |
 Inserito il - 20 gennaio 2007 : 17:04:29
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ciao a tutti, qualcuno di voi si è mai trovato a dover digerire dei pezzi (linfonodi/milza/polmone/tonsilla/derma/ecc) per ricavarne cellule primarie (endoteliali/fibroblasti/ecc)?
se avete familiarità con queste procedure, e le avete in qualche modo ottimizzate mi potreste essere d'aiuto perchè il semplice sminuzzamento + digestione con collagenasi/dispasi ha un'efficienza molto bassa
grazie!
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 20 gennaio 2007 : 21:34:45
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Io faccio colture primarie neuronali, e faccio una digestione con papaina.
Dei miei amici usano un protocollo simile per la surrenale.
Loro usano collagenasi per 30' e poi papaina per 30-45' a 37°C. Dopo di questo blocchi la digestione con siero, centrifughi, risospendi il pellet in un piccolo volume e sminuzzi con una Pasteaur o con una punta da P1000. |
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prandoFDA
Nuovo Arrivato
Prov.: Brescia
Città: Botticino
17 Messaggi |
Inserito il - 22 gennaio 2007 : 16:49:16
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papaina? ma dai...che figata..e quanto costa? con la tripsina invece hai mai fatto pre-digestioni?
il mio problema è che dopo la digestione restano cmq pezzi enormi di pseudo-parenchima che non riesco a filtrare (nonostante l'ultima volta abbia triplicato il tempo di incubazione)
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 22 gennaio 2007 : 22:38:15
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Ho usato la tripsina, ma danneggia troppo il tessuto.
La papaina costa poco, tipo un 15-20 euro per 25g. (conta che ne uso ~10mg per 5ml di buffer di dissociazione, quindi dura un bel po') |
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prandoFDA
Nuovo Arrivato
Prov.: Brescia
Città: Botticino
17 Messaggi |
Inserito il - 23 gennaio 2007 : 12:18:33
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| uhmm...sapresti anche dirmi la ditta da cui ti servi? magari gli chiedo un'aliquota omaggio... |
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chick80
Moderatore
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