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FrostingSprinkle
Nuovo Arrivato
Città: Roma
8 Messaggi |
 Inserito il - 18 novembre 2012 : 16:55:29
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Ciao a tutti! Sto preparando una relazione di laboratorio per l'esame di Biologia Molecolare. Nelle nostre esperienze di laboratorio didattico abbiamo operato una digestione di materiale plasmidico per poi sottoporla ad amplificazione mediante PCR e visualizzarne i risultati tramite elettroforesi in gel di agarosio.
Ho però un problema riguardo il contenuto di una provetta. Mi vien difficile prendere appunti nelle esperienze di laboratorio, quindi ho lasciato alcuni punti in sospeso e non so decifrarli.
Abbiamo preparato 4 eppendorf siglate con la lettera E rispettivamente contenenti:
1) PCR: acqua + 10 microlitri di PCR (?) + tampone 10X e EcoRI (5Uc/microlitro)
l'unico appunto che ho aggiunto in queste righe è stato "gene amplificato: PAO" 
2) Miniprep con EcoRI e RNasi
(acqua, miniprep, tampone ed enzima di restrizione, RNasi)
3) Miniprep con EcoRI, senza la RNasi
4) Miniprep solo con RNasi, senza EcoRI
+ un campione contrassegnato con P contentente:
acqua e miniprep senza RNasi né EcoRI
Non vi dico le quantità di tutto perché credo sia ridondante.
Se dovessero servire, le aggiungerò.
I miei dubbi sono da ricondurre al punto 1). Cos'è quel preparato di PCR? Non capisco
Al punto 3) 4) e 5) ho dei campioni che sono stati utilizzati come una sorta di "confronto didattico" per farci vedere cosa succede se non mettiamo enzima di restrizione e/o RNasi (nel campione c'erano anche degli RNA) visualizzandolo su gel.
Il risultato della nostra corsa è stato quello che allegherò.
Il problema è che avevo tre campioni e qui ho sei corse . Non riesco a mettere insieme i pezzi, dannazione 
Vedi che vuol dire non fare le domande giuste al momento giusto?
Qualcuno sa illuminarmi almeno sulla mia prima domanda, quella sulla soluzione di PCR?
Gliene sarei più che grata!
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FrostingSprinkle
Nuovo Arrivato
Città: Roma
8 Messaggi |
Inserito il - 18 novembre 2012 : 16:58:43
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ecco il risultato della PCR
non c'è una legenda =_=
uno di quello con le strusciate è sicuramente il campione senza RNasi. Il terzo è sicuramente quello con EcoRI e RNasi, correttamente digerito. L'altro con la strusciata dovrebbe essere quello senza né RNasi né EcoRI... E quello con le due bande è quello senza EcoRI, o è quello con una banda sola? E quello con "E PCR" cosa è e perché?
La banda grigetta iniziale dovrebbe essere quella di confronto... oppure le bande sono sei (non contando quella sbiadita) perché una è di confronto? Non credo!
Accidenti, come primo approccio alle tecniche di laboratorio non stiamo messi tanto bene |
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Protocollo per PCR: relazione di laboratorio pro esame
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