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roselady
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119 Messaggi

Inserito il - 21 gennaio 2013 : 20:28:03  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di roselady Invia a roselady un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao ragazzi , potreste spiegarmi qual è il ragionamento per "passare" le piastre di cellule,ovvero diluirle 1:2 , 1:5 etc etc ?
A me sembra di fare sempre la stessa cosa sinceramente,qualunque sia la diluizione o.O
Ad esempio se faccio una diluizione 1:2 di cellule dopo averle staccate con 1 ml di tripsina di solito risospendo queste cellule in 5 ml di terreno per un totale di 6 ml,dopodichè in due nuove piastre metto 7 ml di terreno rispettivamente e (sempre in ognuna) 3 ml di cellule risospese precedentemente in terreno ...
Diluizione 1:5?
risospendo le cell in 5ml di terreno e di questi prendo 1 ml e lo metto in una piastra nuova contenente 9 ml di terreno nuovo...
Ma per quella 1:10 ? a me verrebbe di fare la stessa cosa,ma sbaglio :(
come posso fare? grazie :)

Giuliano652
Moderatore

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Prov.: Brescia


6941 Messaggi

Inserito il - 21 gennaio 2013 : 20:36:36  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Giuliano652 Invia a Giuliano652 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Citazione:
Messaggio inserito da roselady


Ad esempio se faccio una diluizione 1:2 di cellule dopo averle staccate con 1 ml di tripsina di solito risospendo queste cellule in 5 ml di terreno per un totale di 6 ml,dopodichè in due nuove piastre metto 7 ml di terreno rispettivamente e (sempre in ognuna) 3 ml di cellule risospese precedentemente in terreno ...


Aspé che non so se ho capito.
Tu prendi le cellule, ci metti 1 ml di tripsina, poi le risospendi con 5 ml, totale 6 ml, poi metti 3 ml di queste in 7 ml di terreno in un'altra flask... ma perché la fai così complicata? Voglio dire, la diluizione 1:2 delle cellule vuole semplicemente che tu divida in due il numero di cellule nella flask/eppendorf/falcon/quellochevuoi. Non è importante il volume finale, ma quante ne prendi dalla prima risospensione. Se avessi risospeso con 2 ml (totale 3 ml) e poi avessi preso 1,5 ml per rimetterli negli stessi 7 ml che usi, avresti avuto lo stesso risultato

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roselady
Nuovo Arrivato

Prov.: Napoli
Città: napoli


119 Messaggi

Inserito il - 21 gennaio 2013 : 23:14:13  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di roselady Invia a roselady un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Hai ragione,ho capito che vuoi dire e ti ringrazio per la risposta,ma così me lo hanno insegnato al tirocinio xD Non è farina del mio sacco,infatti anche per me è un pò ostico questo procedimento...ma è così e tu hai capito anche bene .. ma se volessi fare una diluizione 1:10 come faccio? o anche 1:15 ? cioè ad esempio per una diluizione 1:10 io risospenderei le cellule in 9 ml di terreno e 1 di tripsina per un totale di 10 ml,e di questi prenderei 1 ml e lo metterei in 9 ml di una flask nuova o.O MA mi sembra uno spreco di terreno esagerato!
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Giuliano652
Moderatore

profilo

Prov.: Brescia


6941 Messaggi

Inserito il - 22 gennaio 2013 : 07:05:55  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Giuliano652 Invia a Giuliano652 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
sì, effettivamente è uno spreco di materiale. Per 1:10 puoi fare 1 ml di tripsina e 4 di terreno, prendendo poi 0,5 ml, o fare un totale di 2 ml e poi prendere 0,2 ml per ridiluirlo. Non c'è bisogno di arrivare ad avere volumi così grandi

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roselady
Nuovo Arrivato

Prov.: Napoli
Città: napoli


119 Messaggi

Inserito il - 05 febbraio 2013 : 19:35:10  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di roselady Invia a roselady un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Grazie mille e scusa se ti rispondo solo ora,mi hai illuminato :D
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