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le_serena
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3 Messaggi

Inserito il - 13 maggio 2013 : 20:04:42

Ciao a tutti!
Premetto che sono abbastanza ignorante in materia, quindi qualsiasi suggerimento sar� ben accetto :)
Ho delle colture di linfociti umani periferici (300 uL di sangue intero in 4,7 ml di terreno RPMI 1640+fbs20%+pha+antibiotici).
Dopo 1 giorno di coltura effettuo una centrifugazione e avrei bisogno di confrontare le proteine presenti nel surnatante, a seguito di diversi trattamenti.

I miei dubbi sono questi:

1) posso prelevare questo surnatante, conservarlo in qualche modo e analizzarlo in un secondo momento? se si come va conservato?
2) dal momento che questo mezzo non contiene cellule, ho modo di concentrare delle proteine che sono diluite praticamente in 5 ml?
3) supponete che io riesca a eliminare il poco siero umano messo in coltura e il siero bovino... quello che analizzo � l'RPMI da solo contentente delle fantomatiche proteine di cui ignoro natura e dimensione. Con un SDS page riuscirei a vedere differenze nel pattern di bande tra un trattamento e l'altro?

qualsiasi genere di idea � ben accetta perch� io non so proprio dove mettere mano

grazie!