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Autore

Discussione

biomol
Nuovo Arrivato

65 Messaggi

Inserito il - 18 febbraio 2007 : 19:46:22

caio!ho un dubio ho due anticorpi per un'esperimento (devo vedere i livelli di espressione de P-ERK)e i due anticorpi che mi hanno portato sono uno P-ERK muose e uno P-ERK tot rabbit.secondo voi quello di mouse è il primario e quello di rabbit il secondario?
grazie

Giuliano652
Moderatore

Prov.: Brescia

6941 Messaggi

Inserito il - 18 febbraio 2007 : 19:56:11

Sono ignorante in fatto di western e compagnia "anticorpale" bella ma... mouse e rabbit non sono entrambi secondari? Si legano all'Fc dell'anticorpo usato, in questo caso l'anti-P-ERK. Poi ripeto, ho poca esperienza nell'utilizzo di anticorpi primari e secondari, potrei anche dire una frescaccia

Anzi se qualcuno mi leva sto dubbio mi fa un favore

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drophy
Nuovo Arrivato

Prov.: lecce
Città: copertino

11 Messaggi

Inserito il - 18 febbraio 2007 : 20:47:39

...si in effetti anti-mouse e anti-rabbit sono entrambi anticorpi secondari...la scelta su quale dei due usare deve essere fatta in base all'anticorpo primario a disposizione...se è in mouse o in rabbit...

Giuliano652
Moderatore

Prov.: Brescia

6941 Messaggi

Inserito il - 18 febbraio 2007 : 21:00:08

Mi è venuta in mente una cosa. A meno che quella P non voglia dire "fosforilato", uno è per il totale, l'altro è per la forma fosforilata, e sono entrambi primari (mouse e rabbit ti dice quale secondario usare). Mi è venuto in mente perché una mia amica lavorava su PERK (che lei ha sempre scritto così) che non è ERK fosforilato

drophy
Nuovo Arrivato

Prov.: lecce
Città: copertino

11 Messaggi

Inserito il - 18 febbraio 2007 : 21:24:45

..si potrebbe trattarsi di due anticorpi primari di cui uno specifico per la forma fosforilata ...quindi è ERK totale rabbit e non PERK totale rabbit..dovresti accertarti di questo...

Iside
Utente Attivo

Città: Napoli

1375 Messaggi

Inserito il - 18 febbraio 2007 : 21:44:35

hai scritto che quello rabbit è un P-ERK totale...forse ti sbagli e si tratta di ERK e non di P-ERK. te lo dico perchè quando faccio un western per ERK mi vado a cercare prima la forma fosforilata e poi quella totale. se così fosse allora dovresti avere in mano un P-ERK mouse (per il quale poi ti occorre un Ab secondario anti-mouse) e un ERK totale rabbit (per il quale ti serve dopo un secondario anti-rabbit). Ergo, quoto Giuliano. sono deu primari, anche perchè non puoi avere un primario mouse e un secondario rabbit e viceversa:non si legheranno mai!
non vorrei sbagliare ma io uso gli Ab della S.C. e p-ERK è mouse mentre ERK totale è rabbit.
ciao

...we're just two lost souls swimming in a fishbawl...year after year...

biomol
Nuovo Arrivato

65 Messaggi

Inserito il - 19 febbraio 2007 : 12:52:43

grazie tantissime!ho risolto il problema..avrei fatto un casotto.....