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Autore

Discussione

ell8830
Nuovo Arrivato

9 Messaggi

Inserito il - 28 ottobre 2013 : 16:51:53

salve io avrei questo esercizio:
Disegnare un primer per inserire l 'enzima piruvato deidrogenasi nel vettore pUC19.
qualcuno mi consiglia come farlo?
grazie

vdolce
Nuovo Arrivato

4 Messaggi

Inserito il - 10 novembre 2013 : 10:05:53

scusa ma questo � un esercizio teorico?
non � molto facile da spiegare a chi lo deve fare veramente e non sa da dove iniziare
cmq ci provo
trova la sequenza nucleotidica della piruvato DH (nelle banche dati)
controlla che nella sequenza che vuoi clonare non ci siano gli enzimi di restrizione che vuoi usare nel clonaggio (e che devono essere invece presenti nel polilinker del plasmide)
scrivi due primer forward e reverse (scritti al 5' e al 3' della sequenza che vuoi clonare) dopo che li hai scritti al 5' dei due primer aggiungi i siti di restrizione che ti servono nel clonaggio
fai la PCR con questi primer su cDNA
digerisci il frammento che hai avuto e il vettore con gli enzimi di restrizione scelti
sottoponi il tutto a ligazione
e il gioco � fatto