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 Fluorescence-Polarization Assay
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chica3


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Inserito il - 23 gennaio 2014 : 19:54:58  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Pin  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di Pin Invia a Pin un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Salve a tutti!
Scusate se vi disturbo ma devo chiedervi aiuto per un dubbio che mi è sorto.
Sicuramente è la stanchezza da studio ma sono incappato in un paragrafo che mi sta mandando fuori di testa riguardante il TEST DEI CANALI hERG tramite Fluorescence-Polarization Assay.

Da quello che ho capito io uso un kit in cui c'è una porzione di mebrana con i canali hERG e un ligando rappresentato da una molecola capace di legarsi a tali recettori marcata con un fluoroforo.
Uso ora una luce polarizzata che colpisce il fluororo il quale, a sua volta, emana una radiazione avente lo stesso piano di polarizzazione della luce incidente. Ciò è dovuto al fatto che essendo il ligando attaccato al canale hERG esso non può ruotare liberamentee.

Introducendo il mio FARMACO da testare, se esso si lega ai canali hERG, esso andrà a scalzare il ligando marcato che si verrà perciò a trovare in soluzione; in questa situazione la molecola marcata (ligando+fluoroforo) potrà ruotare liberamente e perciò anche il piano della luce subirà delle rotazioni.

La rilevazione perciò viene fatta con un polarimetro che mi permette di valutare la ruotazione del piano della luce, giusto? Ma perchè viene utilizzato un marcatore fluorescente?


"Non è mai tardi per tentar l'ignoto. Non è mai tardi per andar oltre."

Gabriele D'Annunzio

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chica3



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Inserito il - 23 gennaio 2014 : 20:15:59  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Pin  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di Pin Invia a Pin un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Mi mancava una cosa estremamente importante e cioè il principio secondo cui:

le molecole fluorescenti in soluzione, se eccitate con luce polarizzata emettono luce nello stesso piano a condizione che durante l’eccitazione il fluoroforo resti in “stato stazionario”

Questo è quanto accade nel caso il cui il mio tracciante fornito con il kit, rimane legato alla proteina hERG.

Emetteranno luce in un piano differente se le molecole dovessero ruotare durante l’eccitazione del fluoroforo

Questo è quanto accade quando il mio tracciante è stato scalzato dai recettori hERG dal farmaco che ha capacità di legare i suddetti canali.
In poche parole, essendo meno in soluzione il tracciante può ruotare e quindi ruota anche il piano della luce polarizzata (MINORE POLARIZZAZIONE)

Giusto?

P.S.: le parti in neretto sono state trovate in un sito internet che tratta l'argomento anche se in modo rapido.

Grazie ancora a tutti


"Non è mai tardi per tentar l'ignoto. Non è mai tardi per andar oltre."

Gabriele D'Annunzio
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