Messa in evidenza granuli di glicogeno in striscio ematico

Forum

Registrati Discussioni Recenti Preferiti Utenti Cerca Regolamento RSS Statistiche

Utilità

I libri
consigliati:

Biologia della cellula e molecolare
Eduardo D. P. De Robertis, Eduardo M. F. De Robert

Virologia
Renato Dulbecco, Harold S. Ginsberg

Biotecnologie della vita quotidiana
Adriana Bazzi, Paolo Vezzoni

Altri Libri

Nome Utente:	Password:
Riconoscimi automaticamente

Tutti i Forum

MolecularLab

Tecniche

Messa in evidenza granuli di glicogeno in striscio ematico

Nuova Discussione

Nuovo Sondaggio

Rispondi

Aggiungi ai Preferiti

Cerca nelle discussioni

Risorse di Tecniche di Laboratorio:

Didattica e Relazioni

InsideBlog

Siti Scientifici

Protocolli Laboratorio

Siti Scientifici

Ultime notizie

Aggiungi i tag

Quanto � utile/interessante questa discussione:

Autore

Discussione

tambua
Nuovo Arrivato

50 Messaggi

Inserito il - 19 settembre 2014 : 14:14:52

Buongiorno a tutti,
vengo ad esporvi un problema di difficile risoluzione:

Devo mettere in evidenza accumulo di glicogeno all'interno del citosol di linfociti su striscio ematico. Dopo colorazione PAS lo striscio dovrebbe avere colore grigio/azurro e mettere in evidenza in colore rosso l'eventuale presenza del glicogeno. Nei miei strisci il citosol si colora interamente in rosso non permettendomi di fare questa differenziazione.
La metodica che sto applicando � la stessa riportata nel sito:
PAS= ACIDO PERIODICO DI SCHIFF
colotazione istochimica che permette di evidenziare il glicogeno nei tessuti,
tramite delle ricerche sui i miei libri ti riassumo il procedimento
Procedimento
1.Portare le sezioni all'acqua distillata
2. Mettere le sezioni in acido periodico all'1% per 5 min, lavare in acqua distillata
3. Mettere direttamente le sezioni in reattivo di Schiff per 20 min
4. Lavare in acqua distillata
5. Differenziare in acqua di fonte (calda) per 10 min
6. Lavare in acqua distillata
7. Contrastare con ematossilina di Mayer-Harris per 10 sec
8. Lavare in acqua distillata
9. Differenziare in acqua di fonte (calda) per 5 min
10. Lavare in acqua distillata, disidratare, diafanizzare e montare in Eukitt
Soluzioni
Reattivo di Schiff
Sciogliere 5 gr di para-rosanilina in 150 ml di HCl 1 N (83,3 ml di HCl concentrato in 1000 ml di acqua distillata). Sciogliere 5 gr di meta-bisolfito di potassio in 850 ml di acqua distillata. Unire le due soluzioni e lasciare riposare al buio per 2 giorni. Filtrare dopo avere aggiunto 5 gr di carbone attivo
Risultati
Nuclei blu-viola
Sostanze reattive rosso magenta in varie gradazioni

Ho apportato una modifica, consistente nel fissaggio dello striscio in metanolo.
Confido nel vostro aiuto per risolvere questo problema.

Saluti
Claudio