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veronica
Nuovo Arrivato
42 Messaggi |
 Inserito il - 06 marzo 2007 : 13:20:50
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Ciao a tutti, finalmente mi approccio alla tesi....la prima....
Trascrivendo il clonaggio, fatto in laboratorio, mi sono kiesta perkè,in effetti, prima di andare ad inserire un vettore ricombinato nel nostro batterio, lo inseriamo per trasformazione in Coli.
Per amplificarlo?
Per selezionare prima quali sono i vettori ricombinanti e quali no senza perder tempo dopo?
per valutare l'efficienza della trasformazione e della ligasi?????
Insomma qualche idea ce l'ho, ma confermate anhe voi please!!!!!
e se avete qualke idea in +......suggerite pure!!!!!!!!!!!!
ciaooooooooooooooooooo
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Biochica
Utente Junior
285 Messaggi |
 Inserito il - 06 marzo 2007 : 15:56:00
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Ciao...scusa ma non mi è del tutto chiaro quello che scrivi...vediamo se ho capito:
1) hai costruito un plasmide
2) hai trasformato E.coli con la reazione di ligazione
3) hai estratto il DNA plasmidico e hai trasformato un batterio X
Se è così può essere che il batterio X in questione sia un altro ceppo di coli deputato alla produzione di proteine (tipo E.coli BL21) che del suo bel plasmide se ne frega e fa solo proteina mentre il clonaggio ipoteticamente è stato fatto in E.coli DH5alfa che invece il plasmide se lo tiene e se lo coccola per bene...altrimenti non ho capito un tubo del lavoro che hai fatto...
Ti dirò...io faccio i clonaggi in E.coli Stbl4, sono coli ad alta efficienza di trasformazione (lavoro con plasmidi alquanto instabili) ma con l'unico scopo (una volta ottenuto il clonaggio corretto) di avere una discreta quantità di DNA plasmidico per trasfettare tutt'altre cellule che dei batteri manco sono parenti...
Baci Chiara |
Io non sono cattiva...è che mi disegnano così...
-Jessica Rabbit- |
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veronica
Nuovo Arrivato
42 Messaggi |
Inserito il - 06 marzo 2007 : 16:28:41
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Scusa, è vero, sono stata poco kiara.
Prima trasformo coli con il mio vettore e poi faccio una coniugazione con un tutt'altro tipo di batterio, così ke il vettore passi da coli a quest'ultimo.
Grazie ancora. |
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