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gamsbip
Nuovo Arrivato
Prov.: Roma
11 Messaggi |
 Inserito il - 25 settembre 2014 : 14:03:21
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ciao ragazzi ho delle domande per voi, probabilmente stupide, ma....come si fa ad ottenere un vettore retrovirale? quello che non mi è chiaro è che essendo i retrovirus dei virus con genoma ad RNA, come faccio ad inserirci il gene d'interesse, che è invece una molecola di DNA? 8(1)che faccio mi retrotrascrivo prima il genoma di retrovirus e poi lo metto a reagire col gene d'interesse per farlo ricombinare, così ho solo molecole di DNA? oppure (2)mi ricavo il trascritto dal gene d'interesse e lo metto a reagire con il genoma di retrovirus ad RNA?(ma esistono molecole di RNA ricombinante???)Altra domanda: visto che dal retrovirus ho eliminato i geni funzionali, e quindi anche quello della retrotrascrittasi, come fa il virus ad integrarsi nel genoma della cellula ospite? bisogna coinfettare con un virus helper che fornisca la RT?
ringrazio chiunque possa darmi delucidazioni!!!
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Geeko
Utente
Città: Milano
1043 Messaggi |
Inserito il - 25 settembre 2014 : 19:56:53
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| I vettori retrovirali sono comunque di DNA. Quindi classico processo di clonaggio del tuo inserto. Una volta ottenuto il costrutto finale lo co-trasfetti in una linea cellulare di packaging insieme a (solitamente) altri due vettori codificanti per le componenti virali necessarie alla formazione di particelle virali mature (RT compresa). In queste cellule, e solo in queste, il ciclo virale può concludersi con la liberazione di particelle di virus ricombinante. Queste risultano comunque difettive e quindi incapaci di moltiplicarsi dato che solo il vettore contenente il tuo inserto una volta trascritto può essere riconosciuto dalle proteine del capside virale e quindi trasmesso alle cellule target (dato che presenta gli elementi di DNA necessari a questo processo, come le sequenze LTR). |
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