Diluizioni in laboratorio, sono incapace

Forum

Registrati Discussioni Recenti Preferiti Utenti Cerca Regolamento RSS Statistiche

Utilità

I libri
consigliati:

Biologia marina
Giuseppe Cognetti, Giuseppe Magazzù, Michel Sarà

Il secolo del gene
Evelyn Keller Fox

Chimica e propedeutica biochimica. Con CD-ROM
Luciano Binaglia, Bruno Giardina

Altri Libri

Nome Utente:	Password:
Riconoscimi automaticamente

Tutti i Forum

MolecularLab

Biotecnologie

Diluizioni in laboratorio, sono incapace

Nuova Discussione

Nuovo Sondaggio

Rispondi

Aggiungi ai Preferiti

Cerca nelle discussioni

Risorse di Biotecnologie:

Siti Scientifici

Protocolli Laboratorio

Glossario

Didattica e Principi

Multimedia

Ultime notizie

Aggiungi i tag

Quanto è utile/interessante questa discussione:

Autore

Discussione

Armida
Nuovo Arrivato

88 Messaggi

Inserito il - 17 novembre 2014 : 16:07:11

Ciao a tutti! Vi scrivo perchè mi trovo in difficoltà su una cosa e spero che qualcuno possa aiutarmi: non ho ben capito come fare il calcolo quando devo aggiungere una molecola alle mie cellule, partendo da uno stock. Faccio qualche esempio pratico. Ad es. supponiamo di voler aggiungere l'LPS in un pozzetto di cellule da 2 ml (per intenderci una piastra da 6 well). Sappiamo che l'LPS si usa 30ng/ ml; quello che abbiamo noi ovvero il nostro "stock" è 200 ng/ml. Ecco, sinceramente anche se poi ho chiesto aiuto su questo calcolo vorrei capire come si procede per non trovarmi nuovamente in difficoltà. C'è una formula o comunque un metodo a cui ricorrere per farmi questi calcoli in cui spesso inciampo? Sapendo la concentrazione dello stock e come si usa la mia molecola come posso calcolare i microlitri da aggiungere al pozzetto? Un altro esempio: devo aggiungere TNF-alfa ad un pozzetto, questa volta da 500 microlitri (24 well). il mio TNF-alfa si usa 10 ng/ml mentre il nostro stock è 80 ng/ml. Qual'è il calcolo da fare per sapere quanti microlitri aggiungere? Spero con tutto il cuore che ci sia qualcuno in grado di aiutarmi!!

chick80
Moderatore

Città: Edinburgh

11491 Messaggi

Inserito il - 17 novembre 2014 : 18:49:16

Comincio con l'indicarti questa pagina:
http://www.molecularlab.it/principi/calcoli-laboratorio/

Citazione:
Devo aggiungere TNF-alfa ad un pozzetto, questa volta da 500 microlitri (24 well). il mio TNF-alfa si usa 10 ng/ml mentre il nostro stock è 80 ng/ml. Qual'è il calcolo da fare per sapere quanti microlitri aggiungere?

Il calcolo è semplice. Hai uno stock 8 volte più concentrato del necessario, quindi lo devi diluire 8 volte. Questo vuol dire che metterai ad esempio 1ml di stock in 7ml di medium, oppure 500µl di stock in 3.5ml di medium e così via.

Se il tuo volume finale è di 500µl vuol dire che 1/8 del volume (ossia 500/8=62.5µl) dovrà essere costituito da stock, il resto da medium. Quindi 62.5µl di stock e 500-62.5=437.5 di medium.

Per sicurezza puoi ricontrollare che tutto funzioni: nei tuoi 62.5µl=0.0625ml di stock ci saranno 80ng/ml*0.0625ng/ml=5ng di TNF-alfa.
Se metti 5ng in 500µl hai una concentrazione di 10ng/ml, che è effettivamente quello che ti serve.

Sei un nuovo arrivato?
Leggi il regolamento del forum e presentati qui

My photo portfolio (now on G+!)