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sam88
Nuovo Arrivato
10 Messaggi |
 Inserito il - 03 dicembre 2014 : 18:01:53
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Ciao a tutti, io ho un problema che mi sta assillando la testa da un po di tempo e non sono riuscita ancora a venirne a capo.
Avrei bisogno di fare una doppia immunofluorescenza per due anticorpi su una stessa sezione. Il problema è che questi anticorpi sono entrambi dei rabbit, e quindi anche se un antigene è nucleare e l'altro citoplasmatico è molto probabile che il secondario usato per l'anticorpo primario che riconosce l'antigene nucleare riconosca anche il primario che lega l'antigene citoplasmatico.
Ho provato a cercare degli anticorpi diversi che non sono rabbit, ma non ne ho trovati.
Esiste un qualche metodo che possa ovviare a questo problema?
Grazie a tuttiiii!
Sam
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AleXo
Moderatore
Prov.: Estero
Città: San Francisco, California
1550 Messaggi |
Inserito il - 04 dicembre 2014 : 04:47:53
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puoi marcare uno con biotina e usare streptavidin come secondario e l'altro boh, direttamente con un alexafluor (il segnale sara' molto + basso dell'altro). Oppure digerisci uno per rimouvere l'fc e usi due secondari: un anti rabbut fc e un anti rabbit vh/vl(fab) specifici.
i tuoi primari sono monoclonali o poly? li trovi depositati all'ATCC? |
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
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sam88
Nuovo Arrivato
10 Messaggi |
Inserito il - 04 dicembre 2014 : 12:45:37
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Grazie per le vostre risposte!!
allora i primari sono entrambi dei poly! perdona l'ignoranza AleXo...ma non conosco l'ATCC!!
quindi usando questi kit di coniugazione potrei marcare direttamente i due primari con due fluorofori diversi eliminando l problema dei secondari, è giusto?
Se è così, risolverei il problema! |
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AleXo
Moderatore
Prov.: Estero
Città: San Francisco, California
1550 Messaggi |
Inserito il - 05 dicembre 2014 : 02:48:20
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| corretto, ma senza secondari il segnale sara' + debole. |
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sam88
Nuovo Arrivato
10 Messaggi |
Inserito il - 08 dicembre 2014 : 14:08:16
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bè anche se il segnale è più debole penso che si possa tentare lo stesso,
vi ringrazio moltissimo per i suggerimenti! vi farò sapere cosa verrà fuori!
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doppia immunofluorescenza con anticorpi primari rabbit
Didattica e Relazioni
