Come amplificare e purificare PCR lunghe.

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5ringsman
Nuovo Arrivato

11 Messaggi

Inserito il - 18 marzo 2015 : 23:33:52

Devo amplificare 3 segmenti di DNA di 7,4 e3 kb.
Per quello da 7kb, reisco facilmente ad amplificarlo da plasmide ma, dopo purificazione con kit quiagen, promega o PEG, ottendo un basso prodotto e se provo a riamplificare con un altra PCR non ottengo nulla.
Stessa storia per gli altri due frammenti amplificati da genomico... con l'aggiunta che, pur amplificando nelle medesime condizioni, a volte ottengo un prodotto e a volte no.

Cosa sbaglio?
Grazie a tutti

Uther
Nuovo Arrivato

Prov.: Napoli
Citt�: Na

35 Messaggi

Inserito il - 27 marzo 2015 : 12:44:21

Ciao, che mi dici dei primer e delle temperature di annealing?