Passaggi cellulari per una curva di crescita

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Manu25
Nuovo Arrivato

3 Messaggi

Inserito il - 13 agosto 2015 : 11:47:38

Buongiorno a tutti,
sono nuova e mi scuso se ho aperto la discussione nel posto sbagliato.
Devo fare una curva di crescita di una linea di Glioblastoma (le U87) passando da una flasf di 25 a una multiwell da 6 pozzetti.
Par farlo devo passare le cellule 1/3 e devo tenere conto che nel passaggio cambio la superficie, quindi devo fare anche un rapporto di superficie dalla flask da 25cm^2 ai pozzetti di un amultiwell da 6.
Ho seguito questo procedimento ma non sono sicura sia corretto quindi ve lo riporto:
Tripsinizzo le cellule con 400�l di trispina e aggiungo 9600 ml di terreno completo per avere un totale di 10ml per poi centrifugarle.
Una volta centrifugate, tolgo il terreno e risospendo il pellet in 10ml di terreno 5so che � uno spreco di terreno ma nel laboratorio dove sono fanno cos� e mi sono dovuta adattare)
A questo punto faccio il rapporto tre le 2 superfici, quella iniziale di 25cm^2 e quella finale di 9,6cm2 a pozzetto.
25/9.6 = 2.6 quindi ho un rapporto di 1:2.6
Sapendo che devo passare le cellule 1:3 faccio:
10 (che sono gli ml totali in cui ho risospeso le cellule) : 3 (che � a quanto le voglio passare) : 2.6 (che � il rapporto di superficie tra la flask da 25 e i singoli pozzetti di una multiwell da 6)
10/3/2.6= 1.28 ml
Che vuol dire che devo prendere 1.28 ml e metterli in ogni pozzetto della multiwell da 6 e poi aggiungere 720�l di terreno per avere un totale di 2ml a pozzetto.
E' giusto come procedimento?
Scusae ma non l'ho mai fatto e sono da sola in laboratorio in questo momento.
Grazie a tutti,
Manuela