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lybra.83
Nuovo Arrivato
1 Messaggi |
 Inserito il - 30 marzo 2007 : 10:31:42
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Ciao a tutti.In questi giorni sto eseguendo dei Western blot su linfomonociti per quantificare l'espressione di alcune proteine ma i risultati non sono incoraggianti: bande assenti e persino l'actina è poco rilevabile. Di solito uso un blocco di TTBS-latte 5% per 1h, un AbI 1:500 in TBS-latte 5% o/n e un AbII 1:2000 in TBS-latte 5%. Avete qualche consiglio? Magari per un metodo di estrazione su linfomonociti ben "collaudato" ed efficace?Grazie a tutti
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Dionysos
Moderatore
Città: Heidelberg
1913 Messaggi |
Inserito il - 31 marzo 2007 : 14:03:18
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| Togli tutto quel latte dagli anticorpi. mettine di meno. |
Volere libera : questa é la vera dottrina della volontà e della libertà
(F.W. Nietzsche)
Less Jim Morrison, more Sean Morrison!
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domi84
Moderatore
Città: Glasgow
1724 Messaggi |
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drophy
Nuovo Arrivato
Prov.: lecce
Città: copertino
11 Messaggi |
Inserito il - 31 marzo 2007 : 19:49:06
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Potresti provare a diluire l'anticorpo in TBS-tween 0.1% |
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gadano
Nuovo Arrivato
Prov.: Roma
Città: roma
22 Messaggi |
Inserito il - 19 aprile 2007 : 22:58:25
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| come prepari i campioni che carichi? io posso consigliarti qualche protocollo per lisare le cellule ma prima dimmi come fai tu giusto per escludere sia quello il problema. e prova a fare la tubulina, di solito è abbastanza espressa. |
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Iside
Utente Attivo
Città: Napoli
1375 Messaggi |
Inserito il - 20 aprile 2007 : 13:34:06
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Citazione:
Messaggio inserito da Dionysos
Togli tutto quel latte dagli anticorpi. mettine di meno.
d'accordissimo. Per il blocking va bene al 5%, ma per le incubazioni con gli Ab io direi di usarlo al 3%. Importantissimi i lavaggi.
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...we're just two lost souls swimming in a fishbawl...year after year...
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