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anna8311
Nuovo Arrivato
2 Messaggi |
 Inserito il - 03 aprile 2007 : 12:20:16
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salve a tutti...dovrei fare un clonaggio di un gene in un vettore in cui c'è già un altro gene che non mi serve......non sò se è meglio inserire il mio gene nello stesso sito di quello che già c'è (il mio gene lo estraggo per pcr perciò devo decidere alle estremità che sito di restrizione metterci...) o usare un sito diverso...magari facendo prima richiudere il plasmide e poi lo ritaglio....... 
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Sissy
Nuovo Arrivato
Prov.: Varese
12 Messaggi |
Inserito il - 11 aprile 2007 : 11:39:36
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Ciao! Non so quanto posso esserti di aiuto perchè ho fatto una tesi completamente diversa però gli esami gli ho fatti!
Il gene che non ti serve, come dici,lo togli.e guadagni "spazio".Poi dipende se quello che hai tolto è sotto un promotore forte(o che va bene) il gene che devi inserire lo metti li' o se no da un'altra parte del vettore.Spero di di esserti stata d'aiuto.Ciao |
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orcaimpetuosa
Utente Junior
234 Messaggi |
Inserito il - 20 aprile 2007 : 23:56:11
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| perchè nn toglierlo? |
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Cangrande
Utente Junior
Prov.: Verona
280 Messaggi |
Inserito il - 19 maggio 2007 : 14:56:33
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| Magari il primo gene lo avevi inserito in una zona che ti avrebbe permesso la successiva selezione. Controlla anche quello. |
Magnifico atque victoriosissimo Domino, Domino Kani Grandi de la Scala. |
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Dulbecco
Nuovo Arrivato
Prov.: Roma
Città: roma
9 Messaggi |
Inserito il - 02 giugno 2007 : 18:51:31
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| secondo me è meglio togliere il gene che non ti serve soprattuto se il vettore con il tuo gene ti servirà,in futuro, per trasfettare cellule in modo da ottenere un prodotto proteico. se conosci i siti di restrizione per il gene che non ti serve puoi eliminarlo con una semplice digestione enzimatica. A questo punto defosforili il plasmide in modo che non si richiuda e poi puoi inserire il tuo gene di interesse con una semplice reazione di ligation. Cmq il tuo gene da inserire deve avere all'estremità gli stessi siti di restrizione che hai utilizzato per eliminare il gene dal plasmide, in modo da inserirlo nella stessa posizione. spero di esserti stato da aiuto e spero di essere stao chiaro... |
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