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paganoracingkart
Nuovo Arrivato
16 Messaggi |
 Inserito il - 08 ottobre 2017 : 02:43:46
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 Scritto da MolecularLab Mobile
Salve colleghi, scrivo perché ho un dubbio sulle diluizione a radoppio (premetto che ho letto e riletto delle vecchie discussioni sulle diluizioni ma non sn state di mio aiuto). In pratica mi sono avvicinato per la prima volta all'immunofluorescenza e non ricordo come preparare le diluizioni a raddoppio.
Vi faccio un esempio, le utilizzo principalmente per le malattie infettive, prendiamo per esempio la rikettsia che parte da una diluizione da 1:64. Ora se voglio preparare le diluizioni a raddoppio di 1:128 -1:256 - 1:516 -1:1032 come posso fare per prepararle partendo dalla provetta madre 1:64 in modo veloce passando da una provetta ad un altra. Spero che mi sono spiegato bene, attendo delle vostre risposte grazie
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Giuliano652
Moderatore
Prov.: Brescia
6940 Messaggi |
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paganoracingkart
Nuovo Arrivato
16 Messaggi |
Inserito il - 08 ottobre 2017 : 10:38:01
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Scritto da MolecularLab Mobile
Grazie Giuliano l'ho riletta di nuovo ma lo stesso non ho capito. Su link che mi hai mandato dice che bisogna sciogliere una parte della soluzione precedente in una soluzione doppia (nel mio caso 1 di siero e 1 di PBS) ed è qui che mi perdo se parto da la mia soluzione 1:64 preparandola con 10microlitri di siero e 630microlitri di PBS, questa soluzione doppia di quanto deve essere? |
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Caffey
Utente Attivo
Città: Perugia
1496 Messaggi |
 Inserito il - 08 ottobre 2017 : 11:47:37
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Ti manca solo un piccolo dettaglio per capire il tutto, come mancava a me prima che lo facessi la prima volta.
Tu prepari la tua soluzione alla massima concentrazione 1:64 per un totale di 640 uL.
In tutte le altre provette che seguono metti un volume x di PBS, che può essere, per semplicità 320 uL (la metà del volume totale della soluzione 1:64). A questo punto prendi 320 uL dalla provetta 1:64 e li metti nella provetta 2, dove ci sono altri 320 uL di PBS, e fai quindi una diluizione 1:2 (2*64=128). Da questa provetta 1:128, prendi altri 320 uL e li metti nella provetta 3, dove ci sono 320 uL di PBS: altra diluizione 1:2 e ottieni 1:256.
E così via. Mi raccomando pipetta bene per mescolare ad ogni passaggio.
Alla fine ti trovi tutte le tue provette con 320 uL, tranna quella a diluizione minore che conterrà 640 uL. |
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paganoracingkart
Nuovo Arrivato
16 Messaggi |
Inserito il - 08 ottobre 2017 : 18:27:31
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Scritto da MolecularLab Mobile
Caffey grazie mille tutto chiaro |
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Diluizione per immunofluorescenza
Didattica e Relazioni
