Chinasi e fosforilazione

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chinasi atp fosforilazione proteine

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Autore

Discussione

Mary12
Nuovo Arrivato

1 Messaggi

Inserito il - 18 novembre 2018 : 00:18:29

Salve a tutti,
vorrei avere dei consigli riguardo delle tecniche da utilizzare in laboratorio.
Qualcuno sa per caso come potrei fare per dimostrare che una determinata protein chinasi puo' fosforilare una proteina specifica? Sia in vitro che in vivo. Avevo pensato alla FRET ma il problema � che puo' dare un segnale fluorescente anche se non c'� interazione tra le proteine.
Grazie mille per il consiglio

domi84
Moderatore

Citt�: Glasgow

1724 Messaggi

Inserito il - 18 novembre 2018 : 00:35:33

In vitro � abbastanza semplice:
usi l'ATP radioattivo, fai avvenire la reazione, separi le proteine con l'elettroforesi, esponi con una lastra che si impressiona con radioattivo e il gioco � fatto (tecnica conosciuta da molti anni).
Leggevo che ne hanno fatto una versione non radioattiva con un substrato che riconosce i fosfati ma non so quanto bene funzioni.
Per trovare fosforilazioni in cellula l'unico metodo che mi viene in mente � la spettrometria di massa.

Il mio blog: http://domi84.blogspot.com/
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