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Tetra
Nuovo Arrivato
Città: Milano
25 Messaggi |
 Inserito il - 16 aprile 2007 : 17:57:51
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Ciao a tutti, qualcuno mi sa spiegare la differenza tra trasfezione transiente e stabile? (riferita a un frammento di cDNA)
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domi84
Moderatore
Città: Glasgow
1724 Messaggi |
Inserito il - 16 aprile 2007 : 19:08:09
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Quando trasfetti delle cellule inserisci del Dna "estraneo" nella cellula. Questo Dna però non si integra nel genoma (rimane in una forma episomale) per cui, con le divisioni cellulari si perde, e la cellula non produce più quella proteina: questa è una trasfezione transiente.
Una piccola percentuale di cellule (circa il 2% mi pare) integra questo Dna "estraneo" all'interno del genoma, in una posizione casuale. Questa cellula esprimerà in modo continuo la tua proteina: questa è una trasfezione stabile.
Con un procedimento di selezione puoi selezionarti un singolo clone stabile (che quindi esprime stabilmente la proteina) e usarlo per esperimenti .
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Le foto che ho scattato... |
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Tetra
Nuovo Arrivato
Città: Milano
25 Messaggi |
Inserito il - 16 aprile 2007 : 20:26:37
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Grazie per la risposta! Ma scusa se sono tarda... nella trasfezione transiente il DNA estraneo quindi non viene neanche trascritto in RNA? |
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
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Tetra
Nuovo Arrivato
Città: Milano
25 Messaggi |
Inserito il - 16 aprile 2007 : 23:20:26
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Scusate se vi tormento, oltre a poter essere trascritto viene anche tradotto qualche volta?
Qualcuno sa fornirmi un link dove si parla dettagliatamente dell'elettoblotting?
p.s. grazie mille per la risposta sulle sonde radioattive, mi e' stata utilissima all'esame |
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domi84
Moderatore
Città: Glasgow
1724 Messaggi |
Inserito il - 17 aprile 2007 : 12:17:13
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Citazione:
Messaggio inserito da Tetra
Scusate se vi tormento, oltre a poter essere trascritto viene anche tradotto qualche volta?
Non qualche volta, ma potremmo dire sempre. Se dal Dna che tu inserisci si forma un mRna, questo poi viene anche tradotto.
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Tetra
Nuovo Arrivato
Città: Milano
25 Messaggi |
 Inserito il - 17 aprile 2007 : 13:37:41
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Grazie! Se vi mancano le mie domande ditemelo che ritorno alla carica eh! |
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ciottolina
Nuovo Arrivato
Prov.: Varese
Città: varese
35 Messaggi |
Inserito il - 20 aprile 2007 : 18:51:47
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| volevo ricordarti che anche il dna che viene mantenuto nella forma episomale può essere mantenuto all'interno della cellula nei vari cicli di replicazione e quindi in questo modo poter avere l'espressione in modo continuo nella nostra proteina.questo viene ottenuto semplicemente mettendo all'interno del ettore che utilizziamo un operone che sia comptibile con la cellula che decidiamo di scegliere come celula ospite per il nostro esperimento. |
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