piastrare per trasfezione

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scient
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52 Messaggi

Inserito il - 17 ottobre 2022 : 12:26:16

Si devono piastrare le cellule per la trasfezione. Se si devono piastrare le cellule in 3 piastre da 6 cm (~25cm2) e 3 piastre da 10 cm (~60cm2) alla densita' di 75000 cellule/cm2 usando un volume di coltura di 4ml per le piastre da 6 cm e di 10 ml per le piastre da 10 cm. La sospensione cellulare di partenza di 1750000 cellule/ml. Le cellule andranno piastrate in terreno al 5% siero

Mi sono calcolata il numero finale delle cellule che si vogliono piastrare per tre piastre da 25cm2
moltiplicando 75000 cell/cm2* 25cm2*3= 5625000 ed analogamente le cellule nelle piastre da 10 cm
75000cell/cm2*60cm2*3= 13500000 cell tot=19125000

poi mi sono trovata quanto il fattore di diluizione a 6cm e a 10 cm
x=5625000/1750000= 3,21 quindi 12/3.21 =3,738 sosp cell e pertanto 8.262 medium
x=1350000/1750000= 7,71 quindi 30/7.71=3.891sosp cell e 26,109 medium.
E' Corretto ragionare in questi termini? So che comunque fbs pu� creare bolle,per tale motivo posso calcolarmi il volume ad esempio per 20 e 35 ml al posto di 12 e 30? (altrimenti piastrerei in concentrazioni inferiori).

GFPina
Moderatore

Citt�: Milano

8408 Messaggi

Inserito il - 20 ottobre 2022 : 18:00:11

Per me � pi� pratico calcolare il n�cellule/ml anzich� il numero totale, ma comunque il tuo conto � corretto.
S� in genere fai una mix a quella determinata concentrazione e ne fai qualche ml in eccesso in modo poi da prelevare il giusto per ogni piastra e non rischiare che nell'ultima ne vada di meno.

Facendo il conto per ml (non sto a scrivere tutti i conti) ti viene:
x le piastre da 6: 468750 cellule/ml
x le piastre da 10: 450000 cellule/ml
poi moltiplichi per gli ml che vuoi fare ad es. 14 e 35.
Tieni conto che in genere si fa un 10% in pi�, 20 ml per prenderne 12 sono tanti... ma dipende anche da quante cellule hai e quante ne puoi sprecare!

scient
Nuovo Arrivato

52 Messaggi

Inserito il - 20 ottobre 2022 : 19:40:38

Scusami quindi potrei usare il mio metodo o � sbagliato? Come arrivi a quei numeri?