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Fly.b
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 Inserito il - 19 febbraio 2023 : 06:42:27
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Salve, ho un dubbio sul binding recettoriale per saturazione. Non mi è chiaro se va effettuato sullo stesso tessuto o su tessuti diversi. Mi spiego: ho capito che devo trattare il tessuto contenente i recettori con un radioligando; filtrare per eliminare la quota libera di radioligando; misurare la radioattività totale legata. Poi, per ottenere il binding specifico devo prendere lo stesso tessuto, risospenderlo in un tampone nuovo aggiungendo un eccesso di ligando non marcato (freddo) per spiazzare il ligando marcato (caldo). A quel punto bisogna filtrare e misurare la radioattività aspecifica. La radioattività specifica è data dalla differenza tra la radioattività totale e quella apsecifica. Ora io sono nella condizione di avere un tessuto che lega, a livello recettoriale, il ligando non marcato e, a livello aspecifico, il radioligando. A questo punto non mi è ben chiaro se devo prendere questo stesso tessuto, ridisperderlo in una soluzione tampone e rieffettuare l'esperimento con una concentrazione crescente di radioligando o se devo prendere un altro tessuto simile in termini di numero di recettori e rieffettuare la prova. Laddove usassi un tessuto diverso come farei ad essere certa di avere lo stesso numero di recettori? Cioè qualora effettuassi un dosaggio proteico, potrei avere proteine diverse da quelle recettoriali quindi avrei bisogno di un saggio non solo per quantificare i recettori ma per qualificarli. In tal caso quale metodica si impiegherebbe? Altro dubbio, se invece di avere un tessuto avessi recettori isolati, il binding come si effettuerebbe? Cioè in quel caso suppongo che sarebbe possibile predeterminare il numero di recettori, per cui ho ipotizzato di allestire diverse provette e trattare il campione con concentrazioni crescenti di radioligando... Giusto? In ambedue i casi, sia che parta da recettori isolati che da fettine di tessuto parlerei comunque di binding per saturazione? Scusate le domande forse banali ma purtroppo l'argomento mi è risultato un po' ostico. Ringrazio anticipatamente tutti quelli che mi risponderanno. Buona giornata.
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Binding recettoriale per saturazione
