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Autore Discussione  

katia74
Nuovo Arrivato




23 Messaggi
Inserito il - 10 maggio 2007 : 10:21:33  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di katia74 Invia a katia74 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
ciao, sono Katia ...ho iniziato da poco a fare gel 2-d ..e ho già dei problemi.... dopo aver colorato con commassie mi vengono delle strisciate verticali bruttissime che coprono gli spot.........sapete aiutarmi? grazie

Biochica
Utente Junior




285 Messaggi
Inserito il - 10 maggio 2007 : 11:09:35  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Biochica Invia a Biochica un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
sei sicura di non aver caricato troppo campione?
Io non sono cattiva...è che mi disegnano così...
-Jessica Rabbit-
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katia74
Nuovo Arrivato




23 Messaggi
Inserito il - 10 maggio 2007 : 11:23:14  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di katia74 Invia a katia74 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
penso proprio di no.....ne ho caricati 100 microgrammi/microlitro....anzi pensavo fosse anche poco , uso strip da 7 cm...
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Biochica
Utente Junior




285 Messaggi
Inserito il - 10 maggio 2007 : 12:29:32  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Biochica Invia a Biochica un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
i 2d li ho solo visti fare...purtroppo...sono più esperta di monodimensionali, normalmente le strisciate dipendono da un eccesso di campione...o di un sacco di schifezze presenti nel campione...
Io non sono cattiva...è che mi disegnano così...
-Jessica Rabbit-
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Iside
Utente Attivo

Iside_paradise

Città: Napoli


1375 Messaggi
Inserito il - 10 maggio 2007 : 13:48:40  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Iside  Invia a Iside un messaggio Yahoo! Invia a Iside un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
neanche io sono espertissima di gel 2d, però come dice biochica penso che il campione sia troppo concentrato.

prova a caricarne meno e vedi come va la colorazione
...we're just two lost souls swimming in a fishbawl...year after year...
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Gabriele
Utente

Prov.: Pisa
Città: Pisa


615 Messaggi
Inserito il - 10 maggio 2007 : 20:02:54  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Gabriele Invia a Gabriele un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Non avrai sfondato i pozzetti del gel?
"Chi rinuncia alla libertà per la sicurezza, non merita né la libertà né la sicurezza. E finirà col perdere entrambe."
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cuccurullom
Nuovo Arrivato


Città: napoli


14 Messaggi
Inserito il - 11 maggio 2007 : 10:14:47  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di cuccurullom Invia a cuccurullom un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Non credo sia un problema di quantità....E' possibile che il tuo campione sia sporco. Per esempio, se pensi che ci possa essere una contaminazione da acidi nucleici (che interferiscono nel 2D), prova a sonicare brevemente il tuo campione prima di caricarlo. tre cicli da dieci secondi dovrebbero aiutarti.

Buona Fortuna
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Cangrande
Utente Junior

Cangrande Della Scala

Prov.: Verona


280 Messaggi
Inserito il - 19 maggio 2007 : 14:45:49  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Cangrande Invia a Cangrande un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Concordo con entrambe le ipotesi:
- troppo campione
- campione molto sporco
forse di più con la prima...
Magnifico atque victoriosissimo Domino, Domino Kani Grandi de la Scala.
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katia74
Nuovo Arrivato




23 Messaggi
Inserito il - 21 maggio 2007 : 10:14:26  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di katia74 Invia a katia74 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
grazie a tutti...proverò caricare meno campione....
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Bluthenthal
Nuovo Arrivato

Città: Melbourne


3 Messaggi
Inserito il - 02 giugno 2007 : 09:50:50  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Bluthenthal Invia a Bluthenthal un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Anch'io nn sono esperto di gel 2D...
Cmq potrebbero essere dei contaminanti?
Oppure credo possa dipendere dal tipo di campione che stai analizzando...alcuni estratti cellulari hanno abbondanza di una singola proteina che va ha produrti un gran striscione che copre molti spot! Es. albumina nel plasma o IgG. Ci sono poi dei kit fatti ad hoc x degradare queste proteine.
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