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Discussione |
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Dani
Nuovo Arrivato
Prov.: L'Aquila
Città: L'Aquila
8 Messaggi |
 Inserito il - 18 maggio 2007 : 15:39:52
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ciao a tutti sono Daniele dall'Aquila. Vorrei sapere se è possibile che in una lettura allo spettrofotometro dell'RNA, l'assorbanza possa assumere dei valori negativi.Grazie
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Daniele |
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fpotpot
Utente
Città: middleofnowhere
1056 Messaggi |
Inserito il - 18 maggio 2007 : 16:02:50
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ma l'assorbanza e' in funzione della concentrazione no?in teoria se e' negativo vuol dire che c'e'meno materiale che assorbe rispetto allo zero del bianco?a me sembra strano...a meno che il bianco non sia contaminato,ho detto una cavolata? |
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 18 maggio 2007 : 16:45:01
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Ciao Daniele e benvenuto sul forum!
L'assorbanza non dovrebbe assumere valori negativi quando leggi un campione, al massimo puoi avere "zero" se nel tuo campione non c'è in realtà niente (l'assorbanza è ugale al bianco).
Però il problema potrebbe essere nella soluzione che usi per la lettura o nelle cuvette.
La soluzione di lettura potrebbe essere inquinata, ma in questo caso dovrebbe essere contaminata solo quella che hai usato per il bianco (come dice fpotpot), questo è un po' difficile.
La cosa più probabile è che sia un problema con le cuvette: la cuvetta che hai utilizzato per il bianco non è pulita bene oppure se usi due cuvette che ci sia una differenza di lettura tra le due, a me capita questo utilizzando delle apposite cuvette di plastica, ho notato che tra una e l'altra c'è una differenza (anche se minima) di lettura, ma questo è un problema se hai quantità molto basse, in questo caso a me è capitato di avere assorbanze negative.
Puoi risolvere utilizzando la stessa cuvetta per il bianco e il campione: prima misuri il bianco e poi alla stessa cuvetta aggiungi il campione e leggi la concentrazione.
Ciao
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Gabriele
Utente
Prov.: Pisa
Città: Pisa
615 Messaggi |
Inserito il - 18 maggio 2007 : 18:26:14
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| Oppure hai uno spettrofotometro schifoso come il mio,dove non solo il bianco va sottozero ma l'assorbanza diventa dipendente dal volume del campione testato!! |
"Chi rinuncia alla libertà per la sicurezza, non merita né la libertà né la sicurezza. E finirà col perdere entrambe." |
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Cangrande
Utente Junior
Prov.: Verona
280 Messaggi |
Inserito il - 19 maggio 2007 : 14:42:59
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| In effetti gli spettrofotometri vecchi hanno il problema che se rimani sotto un certo volume il raggio non riesce a leggerli.... |
Magnifico atque victoriosissimo Domino, Domino Kani Grandi de la Scala. |
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Dani
Nuovo Arrivato
Prov.: L'Aquila
Città: L'Aquila
8 Messaggi |
Inserito il - 20 maggio 2007 : 18:09:31
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| Grazie ragazzi. Vi farò sapere! |
Daniele |
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samu
Nuovo Arrivato
21 Messaggi |
Inserito il - 21 maggio 2007 : 11:06:37
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anche a me sono capitati valori negativi quando praticamente non avevo estratto nulla....
quindi credo sia sicuramente indice di una resa insufficiente per la diluizione che tu hai usato per la quantificazione..prova diluendo meno il campione...
ciaoo
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Bernardi
Nuovo Arrivato
Prov.: Siena
Città: Siena
14 Messaggi |
Inserito il - 21 maggio 2007 : 12:29:42
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A me invece è capitata una cosa simile, con uno strumento nuovissimo utilizzato anche per le cinetiche di reazione (immaginate) e utilizzando cuvette al quarzo dedicate. Questo strumento non solo mi leggeva un valore negativo di RNA ma anche di proteine, con il risultato che applicando le sue formuline su i miei valori venivano concentrazioni di RNA positive, concentrazioni rivelatesi veritiere in PCR semiquantitativa e quantitativa. Non so che dirti forse dovresti utilizzare formule più specifiche ai tuoi valori di assorbanza, vedo di inviarti quelle di cui ti ho parlato.
Ciao |
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cin
Utente Junior
Prov.: Padova
Città: Padova
558 Messaggi |
Inserito il - 22 maggio 2007 : 13:31:55
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| Passate al nano drop.....è tutta n'atra storia! |
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Gabriele
Utente
Prov.: Pisa
Città: Pisa
615 Messaggi |
Inserito il - 22 maggio 2007 : 15:20:03
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Il nanodrop è una figata,però......me lo compri tu?  |
"Chi rinuncia alla libertà per la sicurezza, non merita né la libertà né la sicurezza. E finirà col perdere entrambe." |
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
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Gabriele
Utente
Prov.: Pisa
Città: Pisa
615 Messaggi |
Inserito il - 23 maggio 2007 : 01:39:47
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naaaaa,meglio andare al CNR a usare il loro aggratis  |
"Chi rinuncia alla libertà per la sicurezza, non merita né la libertà né la sicurezza. E finirà col perdere entrambe." |
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Discussione |
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lettura spettrofotometro
Didattica e Relazioni
