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barba
Nuovo Arrivato
11 Messaggi |
 Inserito il - 25 maggio 2007 : 18:24:29
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Ciao a tutti! Ho clonato una proteina (HsNeu3) nel vettore pCMVTAG5A che aggiunge il tag myc.. ora sto analizzando l'espressione e, anche se l'attività è ok, non lo è il western. Il positivo è sempre ben visibile mai miei campioni invece no; ho usato diversi Iari (9e10 m anti myc della abcam,m anti myc della sigma, m anti myc della zymed)ma il risultato è sempre lo stesso... lo so che l'efficacia di un anticorpo varia da un caso all'altro, ma qualcuno saprebbe consigliarmi un antimyc con cui si è trovato bene? grazie!!!!
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Dulbecco
Nuovo Arrivato
Prov.: Roma
Città: roma
9 Messaggi |
 Inserito il - 25 maggio 2007 : 23:09:20
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Ciao, per questo tipo di proteine "taggate" con il myc,io ho utilizzato un Ab primario murino anti-myc (1:3000) e poi ci sono andato con un Goat anti mouse perossidato (1:20000).CMq penso che vada bene qualsiasi tipo di anticorpo specifico per il myc ma secondo me il problema sta nella tua proteina, soprattutto perché il tuo positivo viene bene.Hai provato a vedere se la sequenza della proteina è corretta o se la sequenza nucleotidica del tuo costrutto ha subito delle mutazioni durante i passaggi di amplificazione?
Che linea cellulare utilizzi per produrre la tua proteina?io ho un problema di resa...grazie e spero di esserti stao di aiuto. |
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barba
Nuovo Arrivato
11 Messaggi |
Inserito il - 26 maggio 2007 : 09:39:56
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| Le sequenze sono perfette.... è per quello che nn riesco a capire dove sta il problema... x esprimere la mia proteina ho utilizzato sia Hela che Cos7 ma entrambe hanno dato lo stesso risultato.. l'attività risulta nella norma, è solo il wb che nn c azzecca. ieri ho provato un'immunofluo sulle Hela, in settimana controllerò anche quella! |
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