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vania
Nuovo Arrivato
Prov.: Milano
Città: milano
29 Messaggi |
 Inserito il - 04 giugno 2007 : 15:46:08
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Ciao a tutti!
Si parla sempre di topi knock out,ma mai di topi knock in.
Nell'esame precedente ho studiato animali trasgenici ottenuti per transgenesi standard(risultato:acqisto di una nuova funzione genica) e animali knock out ottenuti per gene targeting(dove si ha perdita di funzione genica mediante inattivazione genica mirata per ricombinazione omologa).
Nell'easme che sto studiando ora ci sono i topi knock in e non riesco a capire come lo genero e che variazioni ci sono nell'espressione genica.
Vi prego aiutatemi a capire!
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vania |
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Giuliano652
Moderatore
Prov.: Brescia
6941 Messaggi |
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 04 giugno 2007 : 20:57:15
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Semplicemente il knock-in è il contrario del knock-out, un gene anziché essere silenziato (knock-out) viene inserito nel topo (knock-in) ed espresso.
Le applicazioni sono varie:
Ad esempio si può fare una mutazione mirata (anche di un singola base) in un gene A normalmente espresso nel topo e inserirlo tramite knock-in, per vedere che conseguenze provoca quella determinata mutazione.
Oppure si può inserire un determinato gene B o un pezzo di DNA in una localizzazione diversa da quella in cui è normalmente, si possono così mimare traslocazioni.
Oppure inserire in topo un gene umano o un pezzo di gene umano (ad. Es esoni 3 e 4, mentre gli altri esoni rimangono quelli del topo)
Anche il sistema Cre-Lox è in realtà un knock-in!
Il modo per produrre topi knock-in è esattamente lo stesso di quello per i topi knock-out!
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cicciput
Nuovo Arrivato
21 Messaggi |
Inserito il - 23 febbraio 2009 : 17:42:52
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lo so ke è 1 discussione vekkia ma mi interessa approfondire...come può essere usato il sistema Cre-lox per creare knock-in? (mi è chiaro il meccanismo di excisione mediato da Cre che provoca knock-out tessuto-specifico). Non riesco a figurarmelo a livello molecolare...
grazie 1000 in anticipo |
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elly_
Utente Junior
400 Messaggi |
Inserito il - 23 febbraio 2009 : 18:07:01
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| dipende da come sono le sequenze loxP: se un elemento sta in un plasmide e l'altro sta nella sequenza di DNA allora c'è integrazione. |
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RNA world
Utente Junior
370 Messaggi |
Inserito il - 23 febbraio 2009 : 18:21:07
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Per inserire delle sequenze tramite cre in regioni del genoma in cui precedentemente sono stati inseriti dei siti loxp (tramite ricombinazione omologa) si usa la tecnica RMCE, cioè recombinase mediated cassette exchange, perchè la semplice reazione mediata da cre è spostata verso l'excisione e non verso l'integrazione, quindi si usano queste cassette che contengono oltre al gene ortologo (konck-in) anche dei marcatori di selezione che spingono verso l'integrazione del costrutto.
ciao |
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 23 febbraio 2009 : 19:51:06
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Ok spiego meglio questa frase visto che era mia! 
Citazione:
Messaggio inserito da GFPina
Anche il sistema Cre-Lox è in realtà un knock-in!
Intendevo semplicemente dire che quando "crei" il topo "Cre" e il topo "Lox" fai un knock-in. Il topo "Cre" è un topo normale a cui inserisci il gene per la Cre ricombinasi. Il topo "Lox" è un topo a cui sostituisci il gene X normale con lo stesso gene X fiancheggiato da due siti LoxP. Quindi sono 2 topi knock-in.
Poi quando incroci il topo Cre con il topo Lox e hai excisione del gene X allora il topo è un knock-out (tessuto specifico in genere).
Spero di aver dissolto il dubbio!
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cicciput
Nuovo Arrivato
21 Messaggi |
Inserito il - 23 febbraio 2009 : 21:54:55
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sì ora mi è chiaro
avevo capito che il sistema Cre-Lox media una ricombinazione il cui risultato è il knock-in
grazie!!!! |
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ludoviva
Nuovo Arrivato
1 Messaggi |
Inserito il - 01 luglio 2011 : 19:51:10
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| Ciao a tutti!Ho una domanda da porvi riguardo alla procedura del knock-in.Ipotizzando di voler inserire il mio gene al posto di un gene presente nel topo,io devo ragionare a partire dal vettore in cui avevo clonato il gene che voglio inserire oppure posso mettere il mio gene direttamente in un vettore di targeting all'interno del quale vado ad inserire le regioni di omologia con il locus bersaglio,il marcatore di selezione(ex.neo)e via dicendo.Stostudiando da 2 mesi ma mi blocco sul modo di ragionare perchè non riesco ad immaginare visivamente la procedura di knock-out e knock-in.Attendo una vostra risposta al più presto per risollevarmi il morale!Grazie a tutti. |
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