Screening di una libreria di cDNA

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davide8118
Nuovo Arrivato

Prov.: Perugia
Città: San Giustino

10 Messaggi

Inserito il - 28 giugno 2007 : 11:04:03

Per fare lo screening di una libreria di DNA si unano delle sonde opportunamente preparate.

Ma....correggetemi se sbaglio...prima di utilizzare queste sonde devo lisare la cellula, estrapolare il DNA, e frammentare anche quello....GIUSTO?

Se sapete indicarmi qualche link dove vedere meglio lo screening ve ne sarei grato!

Grazie,
Davide.

LUCIA14976
Nuovo Arrivato

20 Messaggi

Inserito il - 30 giugno 2007 : 08:08:41

quando devi scrinare delle libreria prima di tutto trasferisci e fissi le colonie su un supporto tipo lo nitrocellulosa. poi la nitrocellulosa vie fatta passare in tre soluzione: denaturante, neutralizzante e in genere lavata con SSC. dopo aver "cotto" la nitrocellulosa per 2 ore ad 80 gradi si saturano i legami aspecifici nella nitrocellulosa e poi utilizzarlo con la sonda.In tutto questo la cellula viene lisata. il DNA invece viene denaturato per permettere alla solda di legarsi ma non viene frammentato (non si rompono i legami covalenti della doppia elica), anche perchè in genere lo screening di una libreria di cDNA si fa per isolare un messaggero completo. La tua sonda si legherà al messaggero che porta la sequenza a lei complementare e non è necessario che sonda e frammento legato siano della stessa lunghezza