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pippilita
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6 Messaggi |
 Inserito il - 30 giugno 2007 : 14:24:55
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sto eseguendo dei Western Blot utilizzando ab anti MDA in rabbit.purtroppo le lastre si sviluppano in negativo, marker compreso...qualcuno sa dirmi perchè?
P.S. ho già provato tutte le diluizioni possibili sia del 1'ab che del 2'..
grazie in anticipo..
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biomol
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65 Messaggi |
 Inserito il - 01 luglio 2007 : 21:09:10
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ciao,
è successo anche a me e anzitutto devi sapere se il tuo anticorpo primario è monoclonale o policlonale....poi prova ad aumentare il latte nel bloking e se non funzione aggiungi oltre al latte (se già lo fai)anche la bsa nella diluizione dell'anticorpo primario...questo è quello che posso dirti..
in bocca al lupo! |
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plof
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13 Messaggi |
Inserito il - 02 luglio 2007 : 10:58:24
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Citazione:
Messaggio inserito da biomol
......poi prova ad aumentare il latte nel bloking e se non funzione aggiungi oltre al latte (se già lo fai)anche la bsa nella diluizione dell'anticorpo primario...
L'aspetto e' negativo perche' sono le proteine trasferite che fanbno da blocking e appaiono come bande negative sul background. Un effetto di questo tipo puo' capitare, oltre che quando il blocking e' insufficiente, quando si usa siero con emolisi e rivelazione con immunoperossidasi. |
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pippilita
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6 Messaggi |
Inserito il - 03 luglio 2007 : 19:40:20
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l'anticorpo è policlonale, nella sua diluizione c'è bsa1% e NaN3 0.1%. il bloccaggio è stato fatto in latte 5% sia per 1h e mezza che over night. con poca differenza. ho anche provato il bloccaggio con una soluzione di BSA1%.
ho provato anche ad omettere il 1' ab per essere sicura che il background non fosse dovuto al legame aspecifico del 2'ab: la lastra non si è impressionata.
la rivelazione è stata fatta con ecl.
non so....grazie cmq per le opinioni! |
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smile105
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Città: Napoli
29 Messaggi |
Inserito il - 07 luglio 2007 : 23:47:47
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Generalmente succede quando c'è un eccesso di campione caricato...fidati,è capitato pure a me!prova a caricare di meno! |
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lastre WB in negativo
Didattica e Relazioni
