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gianfritz
Nuovo Arrivato
3 Messaggi |
 Inserito il - 02 luglio 2007 : 16:10:27
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Salve ragazzi.
Mi sono deciso a provare lo stripping di un filtro di Nitrocell.
Ho utilizzato la sol di stripping con Mercaptoetanolo SDS in PBS/TBS (la conposizione precisa è quella che si trova sulla sezione protocolli del forum)
beh... l'ho fatta sia a TA che a 50 °C per 30 minuti, addirittura ho lasciato tutto per 48 ore...
Risultato il filtro non si è per nulla decolorato
e il sucessivo sviluppo (AgI già testato AbII AP cj) non ha dato nessuna banda
Voi avete provato a strippare filtri sviluppati con AP con risultati positivi?
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biomol
Nuovo Arrivato
65 Messaggi |
Inserito il - 02 luglio 2007 : 17:15:37
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ciao.io non ho mai strippato con AP...ma quando l'ho fatto per il mio anticorpo e mi è successo si non avere nulla è perche non avevo fatto lavare bene il filtro dopo lo stripping e quindi il beta merc avevo inibito la reazione con il secondo anticorpo...spero di ti possa essere di aiuto..
in bocca al lupo |
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 02 luglio 2007 : 22:41:34
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| Lo stripping ti diminuisce l'efficienza del secondo WB. Quindi conviene fare prima il blotting per la proteina meno espressa e poi per quella più espressa. Inoltre ricorda che non puoi confrontare quantitativamente i due blotting. |
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gianfritz
Nuovo Arrivato
3 Messaggi |
Inserito il - 09 luglio 2007 : 10:04:14
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Uhmm... la prova che ho fatto era con un ABI per HSP70... ed ha un'affinità bestiale, figuratevi che ottengo le bande anche solo bagnando per 3 secondi (del tutto inutile tenere il filtro con il I per 1h!!)
Dopo lo strip ho risviluppato per lo stesso ABI con la stessa procedura sin dal blocking, ma nulla.
Ci devo riprovare..
grazie per i consigli.... a presto. |
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WB e stripping
Didattica e Relazioni
