Buongiorno a tutti! è la prima volta che scrivo, spero possiate aiutarmi. secondo voi perchè i saggi di vitalità col trypan blue e con l'MTT vengono condotti parallelamente? attendo illuminanti proproste. Lou
I due test di vitalità vengono condotti parallelamente perchè misurano la vitalità cellulare attraverso parametri differenti. Il test del trypan blue sfrutta la capacità del colorante di penetrare in maniera selettiva all'interno di cellule necrotiche; l'MTT test è invece un test biochimico che si basa sulla capacità di enzimi mitocondriali di convertire i sali di tetrazolio in sali di formazano. Come saprai le cellule i cui mitocondri sono attivi sono da considerarsi vitali. Sono pertanto due test complementari ed i risultati dell'uno e dell'altro devono essere simili negli andamenti.
Buonasera a tutti, volevo gentilmente sapere quale meccanismo biochimico si crea quando inserisco il DMSO in una multiwell, dopo che ho inserito nel terreno una aliquota di MTT e fatto incubare per 2h a 37° e aver poi aspirato il terreno. Mi spiego meglio inserendo nel terreno l'MTT dopo l'incubazione di formano dei cristalli blu nel giallo terreno: ciò indica che più cristalli ho più ho vitalità cellulare? Di seguito aspiro il terreno e aggiungo prima DMSO (che reazione ho con questo additivo?) e poi acqua, per poi procedere alla lettura con lo spettrofotometro a 495 nm. il valore dell'assorbanza più vicino è alla saturazione, cioè a 1, cosa indica? vi ringrazio in anticipo saluti a tutti