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Village
Nuovo Arrivato
Prov.: Napoli
Città: Napoli
10 Messaggi |
 Inserito il - 15 ottobre 2007 : 20:13:00
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Salve a tutti
qualcuno saprebbe darmi maggiori indicazioni riguardo questo composto?
modalità d'azione, utilizzo
grazie
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
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Village
Nuovo Arrivato
Prov.: Napoli
Città: Napoli
10 Messaggi |
Inserito il - 15 ottobre 2007 : 21:02:04
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| gentilissimo,ma più che un protocollo mi servirebbe la modalità d'azione,come agisce |
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 15 ottobre 2007 : 21:39:24
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Giusto in due parole:
La lipofectamina è un "lipide cationico" che lega il DNA (o l'RNA) e poi si fonde con la embrana plasmatica (lipidica) e lo rilascia all'interno della cellula.
Qua trovi informazioni più dettagliate (anche sulla transfezione in generale):
METODICHE DI TRASFEZIONE IN CELLULE DI MAMMIFERO
Io comunque sono una femminuccia!!!  |
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Luca-DNA
Nuovo Arrivato
Prov.: Torino
Città: Torino
68 Messaggi |
Inserito il - 15 ottobre 2007 : 21:52:58
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Se non sbaglio, la lipofectamina non è altro che una molecola composta da una coda cationica (a cui si lega il DNA) ed una regione lipidica (che facilita l'ingresso del DNA attraverso la membrana plasmatica).
Quindi, le lipofectamine legano il DNA esogeno che vuoi trasfettare nelle cellule, creando dei liposomi (vescicole lipidiche artificiali contenenti il DNA esogeno) che, una volta in contatto con la membrana plasmatica delle cellule, si fondono con questa e veicolano l'ingresso nel citoplasma.
Generalmente, il DNA non si integra nel genoma della cellula (trasfezione stabile) ma rimane nel citoplasma per qualche giorno (trasfezione transiente).
La trasfezione con lipofectamina risulta essere molto efficiente, raggiungendo un grado di trasfezione tra 90-100% (ma comunque dipende molto dal tipo cellulare), molto difficile da ottenere con gli altri metodi di trasfezione. |
A scientific man ought to have no wishes, no affections, - a mere heart of stone. (C. Darwin) |
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Village
Nuovo Arrivato
Prov.: Napoli
Città: Napoli
10 Messaggi |
Inserito il - 15 ottobre 2007 : 22:01:42
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| grazie ad entrambi, gentilissimi |
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Eleo
Nuovo Arrivato
Prov.: Pavia
89 Messaggi |
Inserito il - 19 ottobre 2007 : 11:27:08
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piccola precisazione...oltre a legare solo il DNA i reagenti tipo lipofectamine, FuGene ecc, hanno anche la funzione di mascherarne la carica negativa intrinseca e di compattare la molecola...per la trasfezione transiente il plasmide può rimanere supercoiled, mentre per la trasfezione stabile, siccome lo scopo è l'integrazione il plasmide o il frammento di DNA deve essere linearizzato.
chiedo a Luca-DNA come è riuscito ad avere percentuali di trasfezione così alte? nelle migliori ipotesi si ha una trasfezione del 40-50%!!! io ho usato il FuGENE (roche) e un analogo della ditta
MIRUS che hanno lo stesso meccanismo di azione delle lipofectamine/lipofectine ma risultano essere meno tossici e ho ottenuto circa il 35-45% di cellule trasfettate!!! ciao buon lavoro (vi invidio un po' è molto che non faccio trasfezioni e mi manca un sacco!!!)
ciao |
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gigicarlessi
Nuovo Arrivato
Prov.: Bergamo
Città: Brignano Gera d'Adda
3 Messaggi |
Inserito il - 19 ottobre 2007 : 12:42:50
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Tenete presente che ogni transfettante costituito da liposomi ha una sua diversa efficienza, soprattutto dipendente dal tipo di lina cellulare che utilizzate.
Per esempio, la lipofectamina va molto bene per le U2OS, ma è abbastanza tossica per le MCF-7 (per il quale utilizzo il transfast), mentre è quasi totalmente inefficiente nei fibroblati primari, tipo BJ.
Naturalemnet per ogni agente transfettante esistono protocolli da adeguare alle diverse linee |
Carlessi Luigi INT UO1 |
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Luca-DNA
Nuovo Arrivato
Prov.: Torino
Città: Torino
68 Messaggi |
Inserito il - 19 ottobre 2007 : 21:33:15
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Esatto gigicarlessi...dipende dal tipo di cellule che devi trasfettare e anche dal DNA che trasfetti!
Io ho ottenuto (e non sono l'unico nel mio lab) un così alto grado di trasfezione con la lipofectamina 2000 utilizzando cellule COS...cosa che difficilmente ottengo utilizzando altre tecniche di trasfezione, come ad esempio il DAE-DESTRANO oppure il Calcio-fosfato! In altre cellule ho ottenuto gradi di trasfezione minori, ma mai sotto il 50%... |
A scientific man ought to have no wishes, no affections, - a mere heart of stone. (C. Darwin) |
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Village
Nuovo Arrivato
Prov.: Napoli
Città: Napoli
10 Messaggi |
Inserito il - 19 ottobre 2007 : 21:36:25
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| io uso le u2os e saos e mi trovo benissimo |
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Luca-DNA
Nuovo Arrivato
Prov.: Torino
Città: Torino
68 Messaggi |
Inserito il - 19 ottobre 2007 : 21:40:32
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le U2OS e le SAOS sono facilmente trasfettabili? Ho già tenuto in coltura queste linee cellulari...e mi sa che tra un po' dovrei lavorarci sù...segui alla lettera il protocollo della LIPOFECTAMINA?
grazie in anticipo
Luca |
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Village
Nuovo Arrivato
Prov.: Napoli
Città: Napoli
10 Messaggi |
Inserito il - 20 ottobre 2007 : 01:47:43
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Sisi, mi trovo bene
se hai bisogno o hai qualche problema |
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STEFY86VA
Nuovo Arrivato
20 Messaggi |
Inserito il - 24 febbraio 2009 : 10:45:16
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ciao io ho un problema,sto usando questo protocollo x dei monociti isolati da sangue, il protocollo mi indica di usare 200-300 mila cell io ne sto utilizzando 1 milione a pozzetto, secondo voi dovrei aumentare in modo proporzionale le quantità di lipo e siRNA??
inoltre ora che mi si silenziano le cellule ci mettono 7 gg quindi non sono + monociti, avete qualche idea si come accellerare la cosa? |
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Lipofectamina
Didattica e Relazioni
