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Educcio
Nuovo Arrivato
Prov.: Brescia
Città: travagliato
17 Messaggi |
 Inserito il - 03 gennaio 2008 : 23:02:41
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Ciao a tutti, ho dei problemi nel capire il principio di questa tecnica che dovrebbe servire per fare lo screening dello zone metilate del DNA; se qualcuno sa come si fa mi aiuti vi prego...
Grazie e ciao
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aitan3
Nuovo Arrivato
Prov.: Napoli
71 Messaggi |
Inserito il - 03 gennaio 2008 : 23:30:09
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Caro Educcio adi quale tecnica parli ?
dacci maggiori info cosi ti possiamo aiutarti
forse ti riferisci alla MS-PCR? cioè Methylation Specific PCR?
 ASPETTO TUE NOTIZIE |
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Nick_row
Utente Junior
361 Messaggi |
Inserito il - 04 gennaio 2008 : 08:48:25
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parla della mca,come dice nel titolo...o sbaglio?
x edo:cosa stai stud?? |
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la_fra
Utente
750 Messaggi |
Inserito il - 04 gennaio 2008 : 21:48:51
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se ti serve il protocollo lo trovi qui
La metilazione delle CpG islands è associata all'inattivazione trascrizionale del gene a valle, e si è visto che la metilazione aberrante di queste regioni è un meccanismo importante di inattivazione di oncosoppressori nel corso della tumorigenesi, oltre che di silenziamento genico in processi di invecchiamento e in malattie ad esso legate, quindi i profili di metilazione possono essere utili x diagnosi prognosi e valutazione del rischio di diverse patologie.
Il problema è che la valutazione dei livelli di metilazione del DNA in diversi loci è un processo che richiede molto tempo anche perchè è difficilmente automatizzabile. Inoltre l'identificazione di nuove sequenze geniche ipermetilate nel cancro è difficile e poco efficiente con le correnti tecnologie. Per questo è stato sviluppato questo sistema che prevede l'utilizzo di un'endonucleasi di restrizione sensibile alla metilazione (SmaI)che taglia ai siti CpG non metilati, e di un isoschizomero dell'endonucleasi sensibile alla metilazione (XmaI), che taglia sia in corrispondenza di CpG metilate che non metilate.
Gli isoschizomeri hanno infatti proprietà diverse anche in riferimento alla metilazione del loro sito di riconoscimento: una metilasi riconosce lo stesso sito, ma il comportamento dell'isoschizomero corrispondente è diverso (può tagliare un sito metilato e un altro può non tagliarlo). Otterrò pattern diversi a seconda del n° di siti di metilazione e guardando le bande che scompaiono e le bande che aumentano di intensità (somma) capisco dentro che frammento si trova il sito metilato, da cui posso analizzare il grado di metilazione dei siti.
Il metodo include anche l'aggiunta di un oligo nucleotide in condizioni tali da avere il legame dell'oligo al frammento di DNA clivato dall'endonucleasi di restrizione, cosa che permette di amplificare il frammento.
L'amplificato viene infine posto su membrana e ibridizzato con un probe d'interesse
Spero di esserti stata di aiuto e noon averti incasinato ancora di+ le idee |
Doctors are men who prescribe medicines of which they know little, to cure diseases of which they know less, in human beings of whom they know nothing (Voltaire) |
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Educcio
Nuovo Arrivato
Prov.: Brescia
Città: travagliato
17 Messaggi |
Inserito il - 05 gennaio 2008 : 15:25:29
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| il protocollo l'ho letto di questa tecnica, quello che non capisco è come si faccia la "sottrazione" del DNA che è metilato sia nelle cellule tumorali che in quelle di controllo, di modo che alla fine mi resti solo il DNA che è solo metilato nelle cellule tumorali. |
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aiuto MCA: methylated CpG island amplification
Didattica e Relazioni
