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Danyblonde
Nuovo Arrivato
Prov.: Firenze
Cittā: Firenze
15 Messaggi |
 Inserito il - 20 gennaio 2008 : 15:00:08
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ciao a tutti! avrei bisogno di aiuto xke non ho capito il procedimento dell'esperimento sib-selection e non riesco a trovarlo! so ke č usato x ottenere colture pure di cellule resistenti su un terreno liquido,ma non so proprio in cosa consiste.. aiuto grazie!
p.s. qualcuno sa anke cosa sono i mutanti MULTISTEP, cioč come si fa per ottenere in piu step dei batteri mutanti di resistenza? grazie!!
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..And everything under the sun is in tune, but the sun is eclipsed by the moon... |
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lā
Utente Junior
565 Messaggi |
Inserito il - 20 gennaio 2008 : 20:38:51
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sui multistep non ti so' aiutare ma sull'esperimento sib-selectio si.
E' simile al replica-plating.
Si fanno 100 colture di 7 ml ciascuna in parallelo di ceppi di E. coli resistenti alla streptomicina. Dopo una notte in incubazione si seminano da ciascun tubo 3,5 ml per piastra, su piastre contenenti streptomicina.
Ogni coltura era arrivata a saturazione (quindi erano contenuti in ogni coltura 1,7*10 alla -9 batteri totali). Gli altri 3,5 ml sono conservati in frigo. Si guardano le piastre e, per esempio, si vede che nella piastra numero 41 ci sono 37 colonie resistenti: su 3,5 ml che ho seminato ho 10 colonie resistenti/ml. Prendo il tubo 41 dal frigo (che contiene gli altri 3,5 ml), e mi aspetto che ci siano 1,7*10 alla -9 batteri totali e 10 colonie resistenti/ml. Prelevo dal tubo 41 1 ml.Quindi in 1 ml di coltura ho 10 resistenti, se invece prelevo 0,1 ml avro' 1 resistente e 1,7*10 alla -9 batteri totali.
Prelevo 1 ml e lo metto in 10 ml di terreno nuovo e lo suddivido in 10 tubi. Avro' 9 tubi con nessun resistente e 1 tubo con 1 resistente. Avro' che in ogni tubo ci saranno 1,7*10 alla -9 batteri totali.
Se andassi avanti a diluire i batteri totali diminuirebbero sempre di piu', ma per cio' che riguarda i resistenti, arrivero' ad avere con le diluizioni 1 resistente oppure nessuno. In questo modo posso avere una coltura pura dei resistenti.
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esperimento sib-selection
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