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Autore

Discussione

Silvy
Nuovo Arrivato

Prov.: Bergamo
Citt�: Trescore Balneario

26 Messaggi

Inserito il - 18 febbraio 2008 : 21:16:26

Ciao a tutti...
dovrei fare una touchdown PCR per eliminare una banda aspecifica...Normalmente, nella PCR "normale" uso una T di annealing di 55�C e i cicli sono 35. Come faccio a stabilire uno schema per la touchdown? So che devo partire da una Tannealing inizialmente maggiore per qualche ciclo e che poi devo abbassarla, solo che non so quale possa essere eventualmente uno schema valido dato che non ho mai fatto una touchdown.
Grazie per l'attenzione...

GFPina
Moderatore

Citt�: Milano

8408 Messaggi

Inserito il - 19 febbraio 2008 : 01:08:36

Premetto che non mi piace molto la touchdown...

comunque una regola generale �
Parti da una temperatura circa 5�10�C sopra la T di annealing dei tuoi primers, poi la abbassi di 1�2�C ogni ciclo fino alla T di annealing o un paio di gradi sotto.
Dovresti fare delle prove, magari prova prima con meno cicli diminuendo di pi� gradi la temperatura e se non viene fai intervalli pi� stretti.
Un es lo puoi trovare qua:
http://openwetware.org/index.php?title=Berglund:Touchdown_PCR&oldid=48744