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Rossypossy
Nuovo Arrivato
Città: Roma
17 Messaggi |
 Inserito il - 11 marzo 2008 : 21:46:40
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Qualcuno potrebbe indicarmi un buon protocollo per la PCR nested? Mi hanno detto ke nella prima PCR solitamente deve venire uno smir.. v risulta?Grazie!!
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 12 marzo 2008 : 02:00:16
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 no a me non risulta...
casomai puoi dire il contario che se ottieni una PCR con uno "smear" facendo una nested puoi risolvere il problema e ottenere una banda singola, ma questo non vuol dire che "necessariamente" nella prima PCR ci sia uno smear.
Per protocollo non so cosa ti serve, semplicemente devi scegliere due coppie di primers una interna e una esterna, fare una prima PCR con la coppia di primer esterni e utilizzare l'amplificato per fare la seconda PCR con la coppia di primer interni (io diluivo l'amplificato della prima PCR da 1:1000- 1:5000 e ne usavo un microlitro per la seconda PCR).
Qua trovi altri protocolli:
http://www.pcrlinks.com/variants/nested_pcr.htm
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Cangrande
Utente Junior
Prov.: Verona
280 Messaggi |
Inserito il - 12 marzo 2008 : 22:13:37
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| io facevo una diluizione 1:1000 e ne usavo 2ul nella reazione da25ul |
Magnifico atque victoriosissimo Domino, Domino Kani Grandi de la Scala. |
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Nested PCR
Didattica e Relazioni
