| Autore |
Discussione |
|
|
daniela82
Nuovo Arrivato
11 Messaggi |
 Inserito il - 15 aprile 2008 : 15:42:48
|
ciao a tutti,
avrei bisogno di qualche aiutino in vista di un esame.
queste sono alcune domande di un esempio di compito che ho per prepararmi a cui non so rispondere con certezza:
1)volendo preparare una library di cDNA da una certa linea cellulare, con quale tipo di primers può essere effettuata la retrotrascrizione degli mRNA purificati dalle nostre cellule.?
a)esameri-ottameri a seguenza casuale(random)
b)oligo(dT)
c)oligo(dA)
d)con il complementare della sequenza ARS
(sono valide più risposte)
2)quale tecnica usereste per quantificare l'mRNA di una proteina, marcatore dei linfo T, in un tessuto umano?
3)vuoi purificare una proteina da usare come antigene e creare un anticorpo specifico. per facilitare la purificazione puoi usare un tag. Quale tag puoi usare? descrivi il sistema di purificazione più adatto.
lo so che non sono particolarmente difficile ma ho le idee molto confuse.
GRAZIE MILLE
|
|
|
|
|
Klo
Nuovo Arrivato
Prov.: Roma
107 Messaggi |
Inserito il - 15 aprile 2008 : 16:09:10
|
Ciao Daniela io risponderei:
1) oligo dT
2) tecnica dei microarray che consente di vedere quanto una proteina è espressa in un determinato tessuto.
 in attesa che qualcuno smentisca o confermi |
 |
|
|
daniela82
Nuovo Arrivato
11 Messaggi |
Inserito il - 15 aprile 2008 : 16:22:33
|
| grazie |
|
|
|
daniela82
Nuovo Arrivato
11 Messaggi |
Inserito il - 15 aprile 2008 : 16:23:43
|
se qualcuno ha ancora idee...
|
|
|
|
Iside
Utente Attivo
Città: Napoli
1375 Messaggi |
Inserito il - 15 aprile 2008 : 16:27:38
|
Citazione:
Messaggio inserito da daniela82
3)vuoi purificare una proteina da usare come antigene e creare un anticorpo specifico. per facilitare la purificazione puoi usare un tag. Quale tag puoi usare? descrivi il sistema di purificazione più adatto.
io alla 3° risponderei con una cromatografia di affinità. il tag che scegli dipende dalla fase stazionaria a cui vuoi legare la tua proteina, il metodo più semplice che mi viene in mente è un his-tag e cromatografia di affinità con Ni++.
oggi sono in vena di immagini:
Immagine:
111,77 KB
per quanto riguarda la II... un microarray è quali-quantitativo? in questo caso come faccio la quantificazione, mediante intensità del segnale?
io mi semplifico la vita, magari avrei sbagliato ma avrei detto northern blot.
aggiorno: mi era sfuggita la real time  |
...we're just two lost souls swimming in a fishbawl...year after year...
|
|
|
|
Klo
Nuovo Arrivato
Prov.: Roma
107 Messaggi |
Inserito il - 15 aprile 2008 : 16:46:18
|
| si mi era venuta in mente microarray e la quantità la potrei ricavare dall'intensità del segnale,ma forse è più indicato per confrontare l'espressione proteica in tessuti differenti. Quindi meglio RT-PCR, northern blot ,ma a questo punto anche RPA (il saggio di protezione da ribonucleasi),no? |
|
|
|
daniela82
Nuovo Arrivato
11 Messaggi |
Inserito il - 15 aprile 2008 : 17:06:10
|
| vi ringrazio, anche io avevo pensato alla RT-PCR... |
|
|
| |
Discussione |
|
problemino x esame
Siti Scientifici
