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Autore Discussione  

coccinellas
Utente Junior

scienziato pazzo
Città: l'isola che non c'è


138 Messaggi
Inserito il - 26 maggio 2008 : 11:19:14  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di coccinellas Invia a coccinellas un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Qualcuno ha materiale sulla zimografia??
Grazie

ale83t
Nuovo Arrivato

Prov.: Ferrara
Città: Ferrara


21 Messaggi
Inserito il - 10 giugno 2008 : 09:37:54  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di ale83t Invia a ale83t un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
ma ti serve materiale in generale o specifico per un enzima?
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coccinellas
Utente Junior

scienziato pazzo

Città: l'isola che non c'è


138 Messaggi
Inserito il - 13 giugno 2008 : 13:05:07  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di coccinellas Invia a coccinellas un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
.......MI SERVIREBBE materiale generico!
GRAZIE+
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ale83t
Nuovo Arrivato

Prov.: Ferrara
Città: Ferrara


21 Messaggi
Inserito il - 16 giugno 2008 : 12:08:29  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di ale83t Invia a ale83t un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
ti dico, alla fine come materiale generico ti può andar bene un qualsiasi materiale per la comune SDS-PAGE fatta in condizioni non denaturanti (senza l'uso del b-mercaproetanolo e senza bollitura per il pretrattamento del campione), solo che in più si mette a co-polimerizzare nel gel di acrilammide il substrato dell'enzima che ti interessa. Alla fine della corsa elettroforetica si fa una incubazione del gel a 37 °C in un tampone di rinaturazione per l'enzima (l'SDS denatura comunque un po' le proteine) che ti interessa e alla fine si fa una colorazione con il Comassie: il risultato è rappresentato da bande bianche (dove è presente l'enzima) su sfondo blu (il substrato non idrolizzato dall'enzima).
Per esempio, se a te interessa vedere se in un estratto è presente collagenasi ed avere una indicazione semi-quantitativa (più qualitativa però...) può fare una zimografia (leggi SDS-PAGE) con come substrato il collagene.
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