Ciao, dopo aver giocato un pò con il nostro citofluorimetro e aver capito qualcosa in + sono qui a porvi qualche quesito credo base. - in una schermare si possono modificare varie impostazioni come: VOLT GAIN e TOTAL GAIN per tutti i parametri ovvero FS SS FL1 FL2 FL3 FL4 e AUX Qualcuno mi spiega in base a cosa imposto i valori sopra per tutti questi? - di fianco cì+ la schermata compensazione come si imposta?
Il problema è che marcando le stesse cellule con lo stesso anticorpo sia in FITC che in PE, l'anticorpo in PE non mi da lo stesso picco di quello in FITC.
Ma è ovvio che non ti dà lo stesso picco a parte che non so nemmeno se sai come settare il negativo comunque per settare il negativo nella prima decade (se hai un FacsCalibur come credo)il fotomoltiplicatore del FITC sarà sicuramente su un valore e quello del PE su un altro, ed è rispetto ai rispettivi negativi (scusa il gioco di parole) che bisogna vedere lo shift del picco delle cellule marcate. E' comunque per esperienza personale ci sono anticorpi piu o meno bright nelle varie fluorescenze, per cui può anche essere tranquillamente che le stesse cellule vengano positive al 30% se marcate FITC 50% se marcate PE e 30% se marcate APC..
Doctors are men who prescribe medicines of which they know little, to cure diseases of which they know less, in human beings of whom they know nothing (Voltaire)
Ho un COULTER EPICS XL del dopoguerra, il software gira in dos, piuttosto vecchio. so impostare il negativo, il problema è che la differenza tra lo stesso anticorpo in fitc e pe è del 80% un pò troppo credo...
Difficile che si tratti di un clone così scadente (80% è un po' troppo) non può essere che non utilizzi uno dei due anticorpi alla diluzione adatta? Segui il datasheet oppure fai titolazioni per conto tuo?
Volere libera : questa é la vera dottrina della volontà e della libertà (F.W. Nietzsche)
ho provato anche a fare varie prove variando la concentrazione fino a 4 volte ma la positività nn aumenta oltre una differenza tra i due anticorpi del 50-60% quindi credo che nn sia un problema di concentrazion. nn so più cosa pensare. lo stesso anticorp provato per esempio sulle piastrine funziona.
Nuovo dato della settimana: Ho provato lo stesso anticorpo facendo una marcature indiretta e i risultati sono i seguenti: -Ab indiretto FITC 90% circa -Ab indiretto PE 0%
Comincio a pensare che il PE non vada bene su queste cellule o qualcosa del genere. Potrebbe essere un problema di ingombro sterico? HELP ME :)
ragazzi ho combinato un disastro!allora in pratica ero all'ultimo lavaggio con l'acqua per pulirlo ma mi ha detto che dovevo controllare i liquidi, ed infatti non riusciva ad acquisire eventi... solo che io a quel punto l'ho disconnesso dal pc e spento... so di aver sbagliato ma piu o meno quant'è grave questo errore?
ragazzi ho combinato un disastro!allora in pratica ero all'ultimo lavaggio con l'acqua per pulirlo ma mi ha detto che dovevo controllare i liquidi, ed infatti non riusciva ad acquisire eventi... solo che io a quel punto l'ho disconnesso dal pc e spento... so di aver sbagliato ma piu o meno quant'è grave questo errore?
Citofluorimetria
Didattica e Relazioni
Inserito il - 16 aprile 2010 : 19:30:43
