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byo_gio
Nuovo Arrivato
Prov.: MI
Città: Milano
66 Messaggi |
 Inserito il - 15 agosto 2008 : 17:50:06
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Vi e' capitato di avere delle bande in cima al gel, come se fossero rimaste bloccate nei pozzetti e non avessero migrato?
Puo' essere dovuto a un eccessivo carico di proteine nel gel?
Puo' essere dovuto a una corsa troppo veloce? (45 min @ 150V)
Immagine:
95,21 KB
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nyo84
Utente Junior
Prov.: Brescia
Città: Piancogno
239 Messaggi |
Inserito il - 15 agosto 2008 : 18:45:09
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| io intanto che sono nello stacking faccio 100 V per farle compattare bene..cmq è abb strano che ti siano rimaste proprio bloccate lì... |
Fai attenzione quando leggi libri di medicina..potresti morire per un
errore di stampa... |
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paolo865
Utente Junior
Prov.: Como
Città: Olgiate Comasco
262 Messaggi |
Inserito il - 15 agosto 2008 : 19:42:23
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| strano...non è che hai colato male il gel? |
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byo_gio
Nuovo Arrivato
Prov.: MI
Città: Milano
66 Messaggi |
Inserito il - 15 agosto 2008 : 21:05:26
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| e' un precasted... |
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Anyra
Utente Junior
Prov.: Pesaro-Urbino
Città: Saltara
212 Messaggi |
Inserito il - 15 agosto 2008 : 23:06:18
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Che tipo di campione sono?
Se sono estratti potrebbero essere degli aggregati.
Prova a sonicare oppure a bollire unb po' di più (5 minuti)
Comunque il gel non ha corso bene.
Io non setto il voltaggio nell'SDS PAGE, ma faccio 10-15 mA nello stacking e 20-30 mA nel Separating (per un gel, se ho 2 gel raddoppio)
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Il mio Cavaliere
http://s4.battleknight.it/index.php?loc=hire&ref=OTA3NTAw |
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byo_gio
Nuovo Arrivato
Prov.: MI
Città: Milano
66 Messaggi |
Inserito il - 15 agosto 2008 : 23:56:08
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le corsie 4-6-7 sono lisati normali, gli altri sono immunoprecipitazioni. Tutti sono stati bolliti 5 minuti a 100 gradi.
Questi in realta' sono dei nuovi gel che hanno pH neutro e usano un buffer con HEPES al posto della Glicina.
In realta' vorrei solo sapere se a qualcuno e' capitato che una parte del campione non migrasse ma rimanesse come bloccata nella parte superiore del gel, e se si, come si puo' risolvere la cosa. |
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Anyra
Utente Junior
Prov.: Pesaro-Urbino
Città: Saltara
212 Messaggi |
Inserito il - 16 agosto 2008 : 08:23:03
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Scusa l'ovvio, ma hai fatto una SDS PAGE o un'elettroforesi senza SDS,
Che pH ha il tampone?
Se nella lane 1 hai caricato lo standard si peso molecolare anche quello non ha migrato. potrebbe essere un problema di pH.
il gel neutro non dovrebbe dare poi così grossi probemi nello stacking, normalmente si usa un pHdi 6.8 prossimo alla neutralità.
invece potrebbero esserci dei problemi con gli elettroliti. |
Il mio Cavaliere
http://s4.battleknight.it/index.php?loc=hire&ref=OTA3NTAw |
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byo_gio
Nuovo Arrivato
Prov.: MI
Città: Milano
66 Messaggi |
Inserito il - 18 agosto 2008 : 18:28:47
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e' una SDS-PAGE come dice il titolo del post.
il tampone ha pH 8 (raccomandato dalla ditta produttrice dei gel)
il gel ha pH 7 |
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H2O
Nuovo Arrivato
32 Messaggi |
Inserito il - 10 marzo 2009 : 18:07:31
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| Di che marca è il gel? |
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RM
Nuovo Arrivato
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Discussione |
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sds-page: problemi di migrazione
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