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IlaSab
Nuovo Arrivato



3 Messaggi
Inserito il - 21 gennaio 2009 : 17:08:58  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di IlaSab Invia a IlaSab un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao, qui abbiamo un problema con lo sviluppo del western blot, ovvero non si vedono le bande, ma non si vedono neanche i contorni della nitro, il nostro dubbio è: lo sviluppo è avvenuto e quindi il problema riguarda anticorpi o altro?!o non si è proprio sviluppato? Premessa: La corsa è venuta bene, il blotting anche, almeno apparentemente.

Biotecgen
Utente Junior

Città: Napoli


191 Messaggi
Inserito il - 21 gennaio 2009 : 17:21:46  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Biotecgen Invia a Biotecgen un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
quindi al rosso ponceau le bande sono visibili?
in tal caso allora il problema sta nello sviluppo, anche io sto avendo lo stresso problema in questi giorni, stamane ho anche provato a cambiare i liquidi di sviluppo 1 e 2 ma nulla.
non esistono domande indiscrete...le risposte a volte lo sono.
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IlaSab
Nuovo Arrivato



3 Messaggi
Inserito il - 21 gennaio 2009 : 17:25:31  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di IlaSab Invia a IlaSab un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Non si fa il rosso ponceau...
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Biotecgen
Utente Junior

Città: Napoli


191 Messaggi
Inserito il - 21 gennaio 2009 : 17:26:55  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Biotecgen Invia a Biotecgen un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
dopo il trasferimento non fai rosso ponceau?
non esistono domande indiscrete...le risposte a volte lo sono.
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IlaSab
Nuovo Arrivato



3 Messaggi
Inserito il - 21 gennaio 2009 : 17:29:23  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di IlaSab Invia a IlaSab un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
No!
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chick80
Moderatore

DNA

Città: Edinburgh


11491 Messaggi
Inserito il - 21 gennaio 2009 : 19:12:03  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di chick80 Invia a chick80 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Gli anticorpi sono corretti? Stai riusando aliquote vecchie?

Il marker lo vedi sulla nitrocellulosa?

PS: il rosso ponceau non è indispensabile (io non lo facevo mai) pero' in questi casi forse è una buona idea farlo giusto per mettersi l'animo in pace
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nyo84
Utente Junior


Prov.: Brescia
Città: Piancogno


239 Messaggi
Inserito il - 22 gennaio 2009 : 10:50:08  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di nyo84 Invia a nyo84 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
beh..secondo me il rosso ponceau è sempre utile..tanto ci vogliono 5 minuti per la colorazione..almeno ti togli il dubbio del trasferimento..per lo sviluppo io torno a ribadire le bizze dell'ecl..
Fai attenzione quando leggi libri di medicina..potresti morire per un
errore di stampa...
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mattia.dinunzio
Nuovo Arrivato



116 Messaggi
Inserito il - 22 gennaio 2009 : 11:43:41  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di mattia.dinunzio Invia a mattia.dinunzio un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
qui lo dico e qui lo ripeto. X sapere se il vostro liquido di sviluppo non funziona prendete la lastra e mettetela al sole. poi sviluppate. se vi deventa nera come il carbone il liquido funziona e probabilmente il vostro ECL no. in quest ultimo caso provate a esporre la lastra per piu tempo. in ogni caso esistono degli ECL ad altissima potenza in cui bastano pochissimi secondi di esposizione. visitate il sito della Pierce

Riguardo al rosso ponceau io lo farei sempre. almeno vedete se ci sono delle bolle proprio dove cade la vostra banda e vi risparmiate i passaggi successivi...
Ciao
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Biotecgen
Utente Junior

Città: Napoli


191 Messaggi
Inserito il - 22 gennaio 2009 : 12:23:55  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Biotecgen Invia a Biotecgen un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
infatti, come dice Mattia potrebbero essersi formate delle bolle all'altezza della tua proteina e con il rosso ponceau puoi vedere se è avvenuto ciò. Poi non ti ruba tantissimo tempo.
non esistono domande indiscrete...le risposte a volte lo sono.
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