Colture Cellulari
Descrizione
Questa è una tecnica di base per allestire una coltura cellulare
CONTA delle CELLULE
1)Porre in una eppendorf 450 µl di liquido di Turk + 50 µl di sospensione cellulare
2)Prelevare circa 20 µl di soluzione ed inserire nella camera di Burker
3)Contare le cellule in quattro quadranti
4)Effettuare la media (X1+X2+X3+X4/4)
5)Effettuare questo calcolo:MEDIA x 200 (fattore della camera) x 1000 (volume finale)
COLTURA delle CELLULE
6)Diluire le cellule ad una concentrazione finale di 2.500.000 cells/ml utilizzando un terreno completo così composto:
A-10% di siero
B- 1% di glutammina
C- 1% di soluzione di pool di antibiotici (Penicillina e Streptomicina)
D- 1% di Fungizone (Anfotericina)
E-87% di Terreno di Coltura (DMEM, RPMI, ecc.)
7)Piastrare in Capsule Petri o Flask
8)Porre le Petri o le Flask in incubatore a CO2 alla temperatura di 37°C e CO2 al 5%
9)Il tempo in cui si arriverà a confluenza è dipendente dal tipo di cellule
