Protocollo - Precipitazione dei prodotti di PCR

Precipitazione dei prodotti di PCR

Descrizione

In questo modo è possibile ottenere la precipitaziobe dei prodotti della nostra PCR per poter poi operare con la digestione con un enzima di restrizione (x es).

Trasferire la PCR in un eppendorf più grande

Aggiungere nell’ordine:

* 1/10 di V di CH3COONa+ 0.3 M pH = 5.2
* 2.5 V di EtOH assoluto
* 20 µg di glicogeno (1microl)
(il glicogeno è 20 mg/mL che sarebbe uguale a 20 µg/ µl)

Invertire e mettere a -80°C per 15 minuti

Centrifugare per 15 minuti a 13.000 giri

Eliminare il surnatante con una pasteur affilata

Aggiungere 100 µl di EtOH al 70%

Centrifugare per 5 minuti a 13.000 giri

Eliminare il surnatante

Asciugare all’aria fino a quando il pellet diventa trasparente

Risospendere in 10-20 µl di acqua distillata

Conservare a -20°C