TRATTAMENTO CON DNASE TURBO della Ambion
Descrizione
Questa tecnica serve ad eliminare la contaminante di DNA eventualmente presente in un campione di RNA dopo l'estrazione.
Consiglio
Il volume consigliato dalla ditta è di 50 µl, ma si può effettuare anche da 10 a 100 µl, se poi fate la retrotrascrizione, tenete conto del volume finale dell'RT.
Addizionare al campione 0.1 volume di Buffer 10x TURBO DNAse ed 1 µl di DNAse turbo ( il protocollo serve a rimuovere una contaminante di DNA superiore ai 50 µg DNA/ml RNA). Si può considerare 1 µl di DNAse fino a 10 µg di RNA.Incubare a 37°C per 30 min.Addizionare 0.1 volume di DNAse inactivation reagent, precedentemente agitato bene, quest'ultimo dovrà presentarsi opalescente nel puntale.Incubare per 2 min a temperatura ambiente, miscelando di tanto in tanto.Centrifugare a 10000x g per 2 min a temperatura ambiente o a 4°C. Prelevare il surnatante e trasferirlo in un nuovo tubo.Consiglio
Consiglio l'uso del termociclatore e delle provette da 0.2 ml
