Sotto Cappa:

Nelle fiaschette da 25 cm2 va aggiunto 1 ml di Tripsina

-Aspirare il terreno presente e buttarlo nella fogna

-Lavare la fiaschetta con le cellule con RPMI SENZA siero (la Tripsina è inibita dal siero) ,4 ml (sciacquare la superficie di attacco delle cellule)

-Aggiungere 1 ml di Tripsina

-Mettere due minuti in incubatore

-Scuotere la fiaschetta per staccare le cellule

-Vedere al microscopio se le cellule sono staccate

-Aggiungere terreno+siero in un numero divisibile per 6 (diluizione 1 a 6)= 1 ml di Tripsina è già presente, aggiungere 1,4 ml di terreno+siero

\#8220;Risospendere” giocando sulla parete di adesione

-Prendere 0,4 ml dalla fiaschetta=> 650 µlitri, 650 µlitri e 700 µlitri nei tre pozzetti

-Mescolare per fare girare bene le cellule (movimento rotatorio)

-Controllare al microscopio se ci sono cellule

-Incubatore