Colony PCR
Descrizione
La Colony PCR e' un metodo che permette di effettuare un analisi del clonaggio mediante la PCR direttamente sulla colonia senza dover fare una miniprep
Consiglio
lavorare vicinono al bunsen
raccogliere la colonia con l'ansa sterile e metterla a crescere in una provetta da 1,5 ml con 200ul di LB+antibioticoincubare nel caso del ceppo E.Coli a 37°C nella stufa rotante per circa 1 oraprelevare circa 2ul o 5ul (in base alla velocità di crescita del ceppo), metterli in una provetta da 200ul insieme a 50ul di H2O bidistillata filtrata e lasciarli per 10 minuti a T° ambiente;
(In questa maniera si formerà un gradiente osmotico che permetterà il rigonfiamento dei batteri)metterli nel termoblocco o nel termociclatore a 95°C per 5' e rimetterli immediatamente in ghiaccio;
(In questo modo si vara la lisi dei batteri ed il rilascio del DNA plasmidico in soluzione a causa dello shock termico)Per una reazione di PCR in 25ul prelevare 4 o 5ul della soluzione di lisi e procedere con il protocollo di PCR 
