Estrazione DNA da code di topo

Descrizione

Questo protocollo permette l'estrazione di DNA a partire dalle code di topo.
In particolar modo è più specifico per le code di feti di topi, ma può essere adattato anche a topi adulti, considerando comunque che la degradazione del tessuto di partenza è più difficile.

- Le code prelevate dai feti vengono risospese in 600 µl di tampone TNES e digerite overnight con 16 µl di proteinasi K a 55° C.

- Successivamente, il sovranatante viene trasferito in tubi eppendorf nuovi cui vengono aggiunti 166,7 µl di NaCl 5 M.

- Dopo una rapida agitazione mediante vortex, si centrifuga a 13.000 g per 5 minuti a 4°C.

- Il sovranatante viene trasferito in un nuovo tubo cui si aggiungono 2 volumi di etanolo 100% freddo.

- Mescolando, il DNA formerà una piccola nubecola e dopo un’ulteriore centrifugata a 13.000 g per 5 minuti a 4°C, il pellet verrà lavato con 1 ml di etanolo 70% freddo.

- Si centrifuga nuovamente e si elimina il sovranatante, per poter poi far asciugare il pellet in un asciugatore ed eliminare ogni traccia residua di etanolo.

- Dopodiché, si risospende il pellet in H2O sterile (50, 100 o 200 µl a seconda della quantità) e si incuba a 37°C over-night.