Ciao a tutti! Ho un dubbio: se costruisco un vettore retrovirale privo di gag pol (che codifica anche per l'integrasi) e env perchè le sostituisco con il gene di mio interesse, come cacchio fa il vettore poi a integrarsi nel genoma della cellula ospite? Rimane impacchettata l'integrasi nel costrutto? non penso...
Se vuoi produrre dei virus contenenti il vettore devi co-trasfettare un altro plasmide (insieme a quello con il gene) che contiene gag, pol e env. Una volta formati i retrovirus questi al loro interno contengono l'integrasi: http://expasy.org/viralzone/all_by_species/264.html
L'integrasi è una proteina che fa parte del corredo proteico contenuto nel capsìde retrovirale.
Ovviamente, come ti ha detto domi, quando costruisci il vettore , nelle cellule produttrici, devi fornire 'in trans' la sequenza dell'integrasi affinché questa venga espressa e impacchettata nella particella virale del vettore, assieme alla trascrittasi inversa e al genoma a RNA.
Volere libera : questa é la vera dottrina della volontà e della libertà (F.W. Nietzsche)