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Papassina
Nuovo Arrivato
6 Messaggi |
 Inserito il - 15 giugno 2009 : 11:16:39
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Ciao a tutti!!!!
E' la prima volta che vi scrivo e vorrei complimentarmi con voi per le risposte sempre esaustive che date!!!
Avrei bisogno del vostro aiuto poichè devo preparare a breve un lavoro in ppt.
Vorrei avere delle informazioni sulla FRET (forster resonance energy trasfer)...  principio del metodo ma sopratutto le applicazioni verso la real time pcr e se c'è una correlazione con i vari tipi di sonde che vengono utilizzate per l'identificazione degli amplificati di pcr (sonda Taq man, molecular beacons, scorpion, dark quencher...)
GRAZIE MILLE!!!
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 15 giugno 2009 : 11:32:14
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FRET, meglio conosciuta come Fluorescence Resonance Energy Transfer, per una cosa generale guarda anche wikipedia: http://it.wikipedia.org/wiki/FRET
Io sono un po' di fretta, ma sul forum dovresti trovare qualche altra discussione sulla FRET.
Comunque per quanto riguarda la Real-Time le sonde FRET sono quelle utilizzate dal LightCycler.
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
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angemore
Nuovo Arrivato
82 Messaggi |
Inserito il - 15 giugno 2009 : 11:44:38
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.....(ti riporto una parte tratta dal sito dell'applied biosystem riguardo alla real-time e in particolare alla chimica taqman)
Questa tecnica sfrutta una sonda fluorescente e la proprietà esonucleasica 5’ della Taq DNA polimerasi. La sonda oligonucleotidica è specifica per la sequenza bersaglio che si vuole amplificare (di solito si trova a metà tra il “forward” e il “reverse” ), ed è disegnata con un marcatore fluorescente ad alta energia chiamato “reporter” all’estremità 5’ e una molecola a bassa energia chiamata “quencer” all’estremità 3’. Quando la sonda è intatta e viene eccitata da una sorgente luminosa, l’emissione di fluorescenza da parte del “reporter” è soppressa dal “quencer” mediante la proprietà di trasferimento di energia di risonanza della fluorescenza (FRET) a causa della loro vicinanza. Quando la sonda si lega sul templato a valle di uno dei due “primers”, è raggiunta dalla DNA polimerasi che sta sintetizzando il nuovo filamento di DNA e viene tagliata dall’attività 5’ esonucleasica dell’enzima. Come conseguenza, il “reporter” si separa dal “quencer” e l’aumento della distanza tra loro impedisce il trasferimento dell’energia permettendo, così, al “reporter” di emettere fluorescenza. L’incremento del segnale del “reporter”, che è proporzionale alla quantità di prodotto ottenuto dai diversi campioni, è catturato dallo strumento SDS e mostrato dal “software” come grafico di amplificazione......
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Papassina
Nuovo Arrivato
6 Messaggi |
Inserito il - 15 giugno 2009 : 12:02:45
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Intanto grazie a tutti per le risposte che mi avete inviato così velocemente!!!!
Quindi se ho capito bene oltre alle sonde FRET propriamente dette anche quelle Taq man, Scorpion, molecular beacons e uni primers sfruttano tutte il principio di funzionamento della forster resonance energy trasfer?  |
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angemore
Nuovo Arrivato
82 Messaggi |
Inserito il - 15 giugno 2009 : 12:26:52
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Si, in pratica tu hai un reporter che emette fluorescenza e un quencer che la assorbe. Se questi si trovano ad una certa distanza tutta la fluorescenza del reporter è assorbita dal quencer e non si ha segnale. Quando il repoter è allontanato dal quencer (in modo diverso a seconda della metodica che stai usando:taqman, scorpion, molecular beacons, ecc) questo emette la fluorescenza che, a causa dell'aumento della distanza, non è più assorbita dal quencer e quindi è rilevata dallo strumento.
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Papassina
Nuovo Arrivato
6 Messaggi |
Inserito il - 18 giugno 2009 : 20:02:06
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OK!!!! GRAZIE TANTISSIMO A TUTTI VOI!!!! A PRESTO!!!!!  |
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Papassina
Nuovo Arrivato
6 Messaggi |
Inserito il - 20 giugno 2009 : 11:57:27
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Scusatemi mi sapreste dire i principi teorico-applicativi invece della BRET e della BiFC? e poi ho un dubbio...in real time la BRET non ha applicazioni vero? ma solo la fluorescence resonance energy trasfer (FRET) o sbaglio?
grazie mille!!!! |
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
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Papassina
Nuovo Arrivato
6 Messaggi |
Inserito il - 05 luglio 2009 : 14:02:57
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| Grazie a tutti siete stati molto gentili e disponibili!!!!!!!!!!!!! ciao ciao a presto! |
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