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walterilmago
Nuovo Arrivato
Prov.: Palermo
Città: Palermo
1 Messaggi |
 Inserito il - 26 giugno 2004 : 18:00:51
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 Non riesco a capire dal mio testo di genetica (in inglese) come funziona la CGH. AIUTATEMI PLEASE!!
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Rando
Nuovo Arrivato
Prov.: Lodi
17 Messaggi |
 Inserito il - 02 luglio 2004 : 21:10:08
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CGH = Comparative Genomic Hybridization
Già il nome ci dice molte cose:
H -> ci fa capire che si tratterà di ibridazione tra acidi nucleici;
G -> l'ibridazione riguarderà tutto il genoma (genomic);
C -> il fatto che sia comparativa significa che i risultati dell'ibridazione di un genoma in esame saranno confrontati con dei risultati del genoma standard.
Per esempio la CGH può essere utilizzata come metodo citogenetico per screenare nelle cellule di un paziente, le alterazioni genetiche che possono condurre ad un tumore o a malattie neurodegenerative o altro.
Le alterazioni, evidenziate dalla confronto (comparative) vengono classificate come "acquisizioni" o "perdite".
Per semplificare diciamo vogliamo lavorare solo su un cromosoma: poniamo il 22.
Comincio a prepararmi delle sonde:
Isolo da cellule di pazienti con tumore il cromosoma 22, lo taglio a pezzettini di 10-20 bp (oligo) e li marco con un fluoroforo rosso.
Isolo da pazienti sani, [ma se sono sani che pazienti sono!], il cromosoma 22, lo tagliuzzo tutto e lo marco con un fluoroforo verde.
Ora piglio le cellule del paziente in esame, seleziono le cellule in metafase, e con una microdissezione isolo i due cromosomi 22, scaldo un po' o tratto con denaturanti per permettere alla doppia elica di denaturarsi, e quindi procedo alla ibridazione con uguali quantità di entrambe le collezioni di sonde che mi ero sintetizzato.
Il DNA marcato andrà a ibridarsi sul cromosoma se troverà il suo complementare.
Faccio un lavaggio.
Catturo le immagini del cromosoma con una CCD-camera e valuto mediante software di elaborazione delle immagini le differenti intensità del segnale rosso/verde. Se il cromosoma è più rosso che verde... be' la diagnosi poi spetta al medico, però sempre si tratta di un'infausta evidenza molecolare (sempre non considerando i falsi positivi e gli artefatti)
Per ulteriori informazioni e figure esplicative puoi guardare su http://amba.charite.de/cgh/
Da settembre la sezione didattica parlerà anche di CGH.
ciao
Rando |
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Patrizio
Moderatore
Città: Barcellona
1912 Messaggi |
Inserito il - 29 aprile 2008 : 20:05:31
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Citazione:
Messaggio inserito rando
Ora piglio le cellule del paziente in esame, seleziono le cellule in metafase, e con una microdissezione isolo i due cromosomi 22, scaldo un po' o tratto con denaturanti per permettere alla doppia elica di denaturarsi, e quindi procedo alla ibridazione con uguali quantità di entrambe le collezioni di sonde che mi ero sintetizzato.
Stavo studiando il CGH e cercando nel forum ho trovato questo topic,ma secondo me questo passaggio e' sbagliato perche' si dovrebbero prendere le cellule sane,e da quelle tumorali ricavarsi le sonde( oltre che dal controllo ),per poi fare una coibridazione sul cromosoma sano,
correggetemi se sbaglio |
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 29 aprile 2008 : 21:35:23
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Si hai ragione! Le sonde sono prodotte da soggetti sani e malati ma l'ibridazione viene fatta su cromosomi sani!!!  |
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Patrizio
Moderatore
Città: Barcellona
1912 Messaggi |
Inserito il - 29 aprile 2008 : 22:37:47
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| we'...ma come sei brava tu guarda |
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Emanuele3131
Nuovo Arrivato
1 Messaggi |
Inserito il - 29 maggio 2019 : 18:10:23
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| Scusate ma mi sfugge la logica di questa tecnica... cioè non riesco a capire il senso di mettere in competizione di legame i due DNA. Cosa riesco a intuire se si lega più DNA del soggetto malato piuttosto che quello sano? |
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Discussione |
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CGH (Comparative Genomic Hybridization)
Didattica
