Dubbi sulla chimica di reazione della RT-PCR

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Carme
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5 Messaggi

Inserito il - 25 agosto 2012 : 14:26:41

Mi rivolgo a tutti, vi prego aiutatemi se potete. Ho un esame a giorni di biologia molecolare applicata, ho dei dubbi inerenti alla chimica di reazione per verificare l'amplificato di una RT-PCR o PCR Real Time. La Chimica che utilizza sybr green, la taq man, la beacons mi sono chiare, mentre quella di annealing adiacente a parte il fatto che utilizza 2 sonde non ho capito come funziona. Potreste spiegarmela in parole povere? Grazie anticipatamente a tutti

Geeko
Utente

Citt�: Milano

1043 Messaggi

Inserito il - 25 agosto 2012 : 16:21:16

In quel caso hai due sonde che si appaiano appunto in modo adiacente l'una rispetto all'altra sul templato; inoltre la prima sonda presenta ad un'estremit� un reporter, mentre la seconda presenta un quencher all'estremit� adiacente a quella della prima sonda.
Cos� quando durante la fase di allungamento la polimerasi spiazza la prima sonda dal templato (grazie all'attivit� esonucleasica 5'-3') il reporter si allontana dal rispettivo quencher e pu� cos� emettere una fluorescenza ad una data lunghezza d'onda se eccitato, e venire cos� rilevato dallo strumento.

Carme
Nuovo Arrivato

5 Messaggi

Inserito il - 25 agosto 2012 : 17:07:31

Grazie mille, adesso � tutto pi� chiaro, mi appariva talmente complicata mentre � semplicissimo. Mi sento pi� tranquilla adesso